DLBCL中外泌体负载miR-27b及其正反馈调控环路的研究

Our previous study showed that miR-27b was downregulated in diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and was associated with poor clinicopathological features and prognosis, but the mechanism of its downregulation was not yet clear. Preliminary studies have shown that exosome-loaded miR-27b can be released, which may be regulated by VPS4A gene and miR-27b targets gp80, of which downstream molecule STAT3 may regulate VPS4A transcription, suggesting that a positive feedback loop may be formed in the cell to further downregulate the expression level of miR-27b. This study is to observe the effect of VPS4A expression on the release of exosomal miR-27b; to observe the regulation of miR-27b on the target gene gp80 and its effect on the downstream molecule STAT3; to investigate the mechanism of the transcriptional regulation of STAT3 on VPS4A gene; to observe the expression of exosomal miR-27b in the plasma of DLBCL patients, key molecules in the positive feedback loop in DLBCL tissue and their relationship with clinicopathological features. The study will clarify the transfer of exosome-loaded miR-27b and its regulatory mechanisms and confirm the hypothesis of miR-27b/gp80/STAT3/VPS4A positive feedback loop. This study is of great importance for the screening and application of DLBCL individualized therapeutic targets and prognostic markers.

课题组前期研究显示miR-27b在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中低表达，并与不良临床病理特征及预后差相关，但其下调机制尚不清楚。初步研究发现外泌体负载miR-27b释放到细胞外，该过程可能受VPS4A基因调控；并可能通过gp80的下游分子STAT3转录调控VPS4A，提示在胞内形成正反馈环路进一步下调miR-27b水平。本研究拟观察VPS4A表达对外泌体miR-27b释放的影响；观察miR-27b表达对靶基因gp80的调控作用及其对下游分子STAT3表达的影响；探讨STAT3对VPS4A基因的转录调控作用机制；观察DLBCL患者血浆外泌体miR-27b与组织中相关分子表达及其临床病理相关性。项目实施将明确外泌体负载miR-27b及其调控机制，证实miR-27b/gp80/STAT3/VPS4A正反馈调控环路的假说，并对DLBCL个体化治疗靶标及预后标记物的筛选及应用具有重要意义。

弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)发病机制尚不清楚，尽管在治疗上取得了很大的进步，仍有大概 1/3 的晚期 DLBCL 患者对治疗抵抗或治疗后发生复发。课题组前期研究显示miR-27b在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中低表达，并与不良临床病理特征及预后差相关，并通过综合靶基因预测及前期研究的结果阐释了miR-27b 在 DLBCL中发挥其功能的途径，即miR-27b 通过靶向 MET 并抑制 MET/PI3K/AKT途径发挥其抑癌作用。进一步研究发现，外泌体负载miR-27b释放到细胞外，该过程可能受VPS4A基因调控；并可能通过gp80的下游分子STAT3转录调控VPS4A。通过大量实验证实，VPS4A与外泌miR-27b的水平并无显著相关性。因此，我们进一步探究miR-27b是否通过调控下游分子gp80进一步影DLBCL的生物学功能及VPS4A在DLBCL发生发展中的作用及具体机制。本研究主要结论总结如下：1. 在DLBCL中miR-27b通过调控下游分子gp80影响IL-6的水平，进一步影响巨噬细胞极化；2. VPS4A在DLBCL组织中的mRNA和蛋白表达水平均低于反应性淋巴结增生组织；3. VPS4A低表达与DLBCL的原发部位(结内受累)、肿瘤分期(Ann Arbor III- IV期)、B症状、治疗反应等临床特征密切相关，且与预后差相关，VPS4A低表达是DLBCL患者的一个不良预后因子；4. DLBCL细胞中过表达VPS4A可抑制DLBCL细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、阻滞细胞周期和促进氧化磷酸化和ROS产生，抑制DLBCL细胞裸小鼠皮下移植瘤的生长；5. VPS4A可促进线粒体生成相关转录因子NRF1的表达，并促进其进入细胞核中，结合于下游线粒体基因CYC1和ATP5D的启动子区域，调控其转录活性，并进一步促进表达，以增强细胞内氧化磷酸化水平。6. 对DLBCL中重要分子SMYD3、外泌体PD-L1、微卫星不稳定同时进行了研究。本项目的完成对进一步解析DLBCL的发生发展机制具有重要意义。