PEBP4对肝纤维化的影响及机制研究

Hepatic fibrosis and cirrhosis is the common pathology of terminal liver diseases. Hepatic fibrosis has many complications and the prognosis is poor. There is no satisfactory treatments still. PEBP4 is a novel anti-apoptotic molecule. The current study on PEBP4 is focused on tumors, indicating that PEBP4 is associated with the invasion and metastasis of tumors. The latest study confirmed that PEBP4 is a secretory protein, suggesting that it has new biological functions. Basis on the preliminary work, it was found that, compare to wild-type mice, the degree of fatty liver and liver fibrosis are much more serious in PEBP4-deficient mice, suggesting that PEBP4 involved in the regulation of liver fibrosis. Then, in this study, the model of hepatic fibrosis will be established to study the effect of PEBP4 on hepatic fibrosis, and determine the main targets in vivo and in vitro. The project wishes to provide new ideas and theoretical basis on prevention or treatment of hepatic fibrosis.

肝纤维化和肝硬化是晚期肝脏疾病的共同病理归属，其并发症多而且预后差，迄今没有满意的治疗方案。PEBP4是新型抗调亡分子，目前关于PEBP4的研究主要集中于肿瘤，研究结果表明PEBP4与肿瘤细胞侵袭和转移相关。而最新研究证实PEBP4是分泌型蛋白，表明PEBP4存在新的生物学功能。申请者在前期工作中发现，PEBP4缺陷型小鼠相对野生型小鼠，其脂肪肝和肝纤维化程度都更严重，提示PEBP4参与调节肝纤维形成。在此基础上，本课题拟建立肝纤维化模型，从整体、离体、细胞及分子水平系统地研究PEBP4对肝纤维化和肝星状细胞的影响并确定其主要作用靶点，从而为肝纤维化防治提供新的思路和理论依据。

肝纤维化和肝硬化是晚期肝脏疾病的共同病理归属，发病中心环节是肝星状细胞活化，主要病理变化是大量胶原沉积，并发症多而且预后差，迄今没有满意的治疗法。PEBP4是新型抗调亡分子，目前关于PEBP4的研究主要集中于肿瘤，表明PEBP4与肿瘤细胞侵袭和转移相关。而最新研究证实PEBP4是一种分泌型蛋白，提示其存在新的生物学功能。申请者在前期工作中发现，PEBP4缺陷型小鼠相对野生型小鼠，其脂肪肝和肝纤维化程度都更严重，提示PEBP4参与调节肝纤维的形成。在此基础上，课题组首先利用CRISPR/Cas9技术和Cre-loxP重组酶系统构建繁殖了PEBP4肝脏特异性敲除鼠（PEBP4 CKO），然后利用PEBP4 CKO鼠建立慢性肝纤维化和急性肝损伤两个模型观察研究了PEBP4的肝脏保护效应。实验结果表明：PEBP4 CKO鼠其肝脏结构和功能正常，但是肝脏抵抗外界因素侵袭的能力明显降低。PEBP4 CKO鼠相对于野生鼠，CCL4可以诱导更严重的肝纤维化，敲除PEBP4可以促进α-SMA表达升高，诱导HSCs活化、加重胶原纤维沉积、激活NF-κB信号通路（IκBα降解，同时NF-κBp65转位入核），而且NF-κB通路的特异性抑制剂PDTC可以逆转上述效应。在肝损伤模型中获得的实验结果与肝纤维化模型一致，敲除PEBP4可以加重LPS/D-GalN诱导的肝损伤，主要表现为肝脏组织结构紊乱，肝细胞弥漫性坏死，大量红细胞及炎症细胞浸润，炎症反应和凋亡程度均显著加重，TLR4表达上调，IκBα磷酸化水平和降解程度增加，NF-κBp65磷酸化程度升高并且大量转位入核，TLR4/NF-κB通路明显活化，而且TLR4阻断剂TAK-242和NF-κB阻断剂PDTC均部分逆转上述效应。综上所述，PEBP4可以保护肝脏，此效应可能通过抑制NF-κB通路活化而实现。本研究为肝纤维化的防治提供新的思路和理论依据。