CSA大鼠神经-内分泌-免疫网络调节的基因表达谱分析及活血定眩胶囊的干预机制

Cervical Spondylosis of Vretebral Artery Type (CSA) is a common disease, and the incidence rate increased year by year. Though it has caused social and medical attention, its pathogenesis is not yet clear. With the development of medical immunology ,gene chips and molecular biology, the exploration of the pathogenesis of the CSA begins from the neuro - endocrine - immune network (NEI). But NEI's regulatory mechanism is complex, it is hard to explain the mechanism of its impact on the CSA. Traditional Chinese Medicine(TCM) has some characteristics in the treatment of CSA ,Huoxue Dingxuan Capsule is the production of the Affiliated Hospital of Gansu College of TCM. After 10 years of clinical application and preliminary experimental study, it has definite efficacy of the CSA, but its mechanism is not yet clear. This study modelling CSA by bone graft oppression,observe the impact of Huoxue Dingxuan capsule of CSA 's efficacy and the regulatory function of NEI,through in vitro and in vivo experiments, use whole gene expression profiling analyse CSA rats NEI network gene transcription characteristics and explore it's material base , screening CSA incidence key genes from NEI network; observe the influence of drug serum for bEnd.3 cell proliferation and gene expression profiling , demonstrate the function of Huoxue Dingxuan capsule on angiogenesis, so as to explore the mechanism of Huoxue Dingxuan capsule in treatment of CSA , providing the experimental basis for the study of CSA NEI network regulatory mechanism and the clinical application of Huoxue Dingxuan capsule.

CSA为临床常见病，发病率逐年增高，已受到社会和医学界的重视，但其发病机制尚未明了，随着医学免疫、分子生物及基因芯片技术的发展，开始从NEI对CSA的发病进行探讨，但NEI的调控机制复杂，较难解释其对CSA的影响机制；中药在治疗CSA方面具有一定特色，活血定眩胶囊是甘肃中医学院附属医院院内制剂，经过10余年临床应用与前期实验研究，对CSA疗效确切，但其机理尚未明了。本研究拟植骨压迫建立CSA模型，观察活血定眩胶囊对CSA的疗效及对NEI调节功能的影响，并通过体内外实验观察，全基因表达谱分析CSA大鼠NEI网络基因转录特征并探讨其物质基础，从NEI网络筛选影响CSA发病的关键基因；并通过观察含药血清对bEnd.3细胞增殖及基因表达谱分析，论证活血定眩胶囊对血管新生的影响，从而探讨活血定眩胶囊治疗CSA的作用机制，为CSA的NEI网络调控机制研究与活血定眩胶囊的进一步临床推广应用提供实验依据。

椎动脉型颈椎病（CSA）是临床常见病、慢性病，严重影响国民身心健康。CSA是多系统、多因素的综合，其中神经内分泌免疫（NEI）网络平衡在机体内环境的稳态中具有重要作用。中药可通过下丘脑-垂体-靶腺轴发生激素分泌、免疫及神经系统功能，从而通过NEI网络调控CSA的发生发展，但其机制复杂，较难全面阐释。因此，本项目研究借助酶联免疫、流式细胞、激光共聚焦、基因芯片等技术，主要针对以下内容进行研究：CSA大鼠模型建立及活血定眩胶囊治疗效果检测；活血定眩胶囊对CSA大鼠NEI调节功能的影响；CSA大鼠NEI网络基因转录的特征；活血定眩胶囊含药血清对小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3 的影响及基因表达谱分析。并取得重要结果：①采用复合造模法建立了CSA大鼠模型并取得成功；②活血定眩胶囊可降低CSA大鼠全血及血浆黏度，抑制NF-κB、PAI、ET及TXB2的表达，促进t-PA、NO及6-Keto-PGF1α的表达，从而改善CSA大鼠的血管功能；③CSA模型大鼠脑组织NPY、SP、β-EP及血清TNF-α、IL-6、IL-1β、CD3+、CD4+升高，证明CSA与NEI因子密切相关，活血定眩胶囊可通过调控NEI网络来达到治疗CSA的目的；④基因转录特征分析显示：CSA模型大鼠下丘脑、垂体、肾上腺组织中均有不同数目的基因上调或基因下调，从参与基因、基因功能及参与调控的主要信号通路等方面揭示了下丘脑-垂体-肾上腺轴对CSA模型大鼠的主要基因调节作用；⑤活血定眩胶囊含药血清对缺氧所致bEnd.3细胞的损伤具有明显对抗作用，其机制与氧化应激、抑制细胞凋亡、促进血管内皮新生、炎症及免疫反应有关，其在基因水平通过多条信号通路调节血管内皮细胞功能。通过研究，从多个层面系统地阐释了活血定眩胶囊防治CSA的作用机制和药物靶点，为临床应用奠定实验基础。本项目研究发表国内学术论文15篇。培养硕士研究生4名。