多酸基纳米荧光生物探针的制备及其在人畜共患传染病免疫检测中的应用

近年来，人畜共患传染病已成为新发公共传染病的主要疾病，加强对其病原体快速、准确的检测技术研究十分必要。本课题研究是利用纳米技术、生物技术和荧光标记技术，设计合成新型荧光多酸基纳米生物探针，利用免疫学检测原理实现对多种人畜共患传染病的快速、准确检测。本课题的主要研究内容包括：（1）分散性好、粒径可控和具有荧光效应的多酸基纳米粒子的合成表征；（2）对多酸基荧光纳米粒子进行表面修饰引入可与生物分子偶联的活性官能团；（3）病原抗体的制备；（4）设计合理的偶联方式，制备多酸基纳米荧光生物探针；（5）选用多酸基纳米荧光生物探针利用液相芯片分析系统检测分析布鲁氏杆菌、单增李斯特菌等致病菌。本课题研究的目的是利用多酸纳米发光材料的结构特点，设计、制备一类具有广泛应用前景和我国自主知识产权的新型多酸基纳米荧光生物探针，即开发了多酸化学应用的新领域，也有望实现对人兽共患传染病的快速、准确检测。

近年来，新发公共传染病越来越多的呈现出 “人畜共患”的关系，布鲁氏菌和单增李斯特菌是人畜共患传染病中多发且传染性较强的两种重要的食源性人畜共患传染性病原菌，加强对其监控，开发快速、准确的病原菌检测技术现已成为公共卫生检测领域研究的重点课题之一。本课题的研究目的是设计合成多酸基荧光生物探针，利用双抗体夹心原理，借助液相芯片检测技术平台，实现对布鲁氏菌和单增李斯特菌的准确、灵敏检测。.目前课题研究工作已经完成，并取得较为满意的成果。课题研究情况如下：(1)完成了荧光多酸化合物(DMDA)9EuW10O36和[N(C4H9)4]2[V6O13{(OCH2)3CNHCH2C16H9}2]的合成和表征工作，结果表明该化合物具有较好的稳定性和荧光性能。(2)利用自主设计的荧光多酸化合物制备了羧基官能化(DMDA)9EuW10O36@PS、[N(C4H9)4]2[V6O13{(OCH2)3CNHCH2 -C16H9}2]@PS和[N(C4H9)4]2[V6O13{(OCH2)3-CNH-CH2-C16H9}2]@SiO2荧光微球，并对其结构和荧光性质进行表征，结果表明制备的功能化多酸基荧光微球具有良好的荧光特性和稳定性。(3)完成了布鲁氏菌和单增李斯特菌单克隆抗体和多克隆抗体的制备纯化及鉴定，纯化后的兔抗布鲁氏菌和单增李斯特菌多抗纯度较高。采用杂交瘤细胞技术分别制备出IgM型抗单增李斯特菌单克隆抗体和IgG型抗布鲁氏菌单克隆抗体。(4)将单克隆抗体通过共价键偶联到多酸荧光微球上，制备了多酸基荧光生物探针。(5)利用自主制备的多酸基荧光生物探针分别建立了布鲁氏菌和单增李斯特菌流式细胞仪-液相芯片检测方法。选用商品化微球制备布鲁氏菌和单增李斯特菌荧光生物探针，分别建立了布鲁氏菌和单增李斯特菌 Luminex液相芯片检测方法。将两种液相芯片检测方法，分别与标准分离培养法相比较，多酸基荧光生物探针构建的布鲁氏菌和单增李斯特菌流式细胞仪-液相芯片检测方法精密度较高、准确度较好、特异性较强，检测限较低。(6) 研究成果已申请发明专利1项（201310719527.5）；在国内、外期刊发表论文3篇。培养2名硕士和3名博士研究生。.本课题研究所建立的布鲁氏菌和单增李斯特菌的流式细胞仪-液相芯片检测方法有望应用于卫生检验检疫部门，若该研究成果得以应用必将产生较大的社会效益和经济效益。