家族性非髓样甲状腺癌候选致病基因的验证与功能研究

The diseasecausing gene of familial nonmedullary thyroid carcinoma (FNMTC) and its function are still unknown. Several families having FNMTC were identified and exome squencing was used to indentify candidates of the diseasecausing gene. Gene A which is located on Chromosome 14 was confirmed to be relative to FNMTC. More FNMTC families will be investigated and normal people will be included as control to further verify gene A in a larger population. Clone, Immunostaining, MTT, Western blot and Flow will be used to have indepth knowledge of the expression, localization of Protein A. Bioinformatics methods, cDNA chips, two Dimensional Gel Electrophoresis, TAP and TOMFS will be used to screen possible downstream genes and proteins which may have interactions with Gene A. Molecular mechanism of FNMTC can be achieved to provide strong theoretical evidence for screening of potential FNMTC families.

家族性非髓样甲状腺癌（FNMTC）致病基因目前仍未被阐明。课题组前期工作中收集了20个FNMTC家系，对其中一涉及多代多名成员发病的FNMTC大家系成员通过全基因组外显子序列捕获芯片结合高通量测序技术进行研究，结合家系连锁分析初步定位了与FNMTC发病可能相关的致病基因A，该基因位于14号染色体。本项目将对致病基因A进行进一步大样本验证研究分析，包括其他家系与散发患者对比分析验证及正常人群验证。然后对致病基因A进行功能研究：1. 通过克隆、免疫染色、MTT、Western blot及流式技术，明确蛋白A的表达分布特点、亚细胞定位及其与FNMTC发生的相关性；2. 通过生物信息学分析，cDNA芯片，双向凝胶电泳、质谱分析、串联亲和纯化及飞行时间质谱等技术，筛选基因A下游效应分子及相互作用蛋白，阐明FNMTC发生的分子遗传学机制，为临床该类患者的早期诊治和家系成员的筛查提供实验基础和理论依据。

家族性非髓样甲状腺癌（FNMTC）致病基因仍未被阐明。课题组前期收集了50多个FNMTC 家系样本，我们设计了一款包含30多个与FNMTC发病相关 易感基因的基因芯片，采用深度二代测序技术对目的基因进行深度的测序。结果发现，一些基因的遗传性突变如，APC L292F 、 A2778S, BRAF D22N, MSH6 G355S 、A36V, MSH2 L719F, MEN1 G508D, BRCA1 SS955S, BRCA2 G2508S 等在同一家系的患者中配对出现。因此我们的研究成果对FNMTC 的诊断提供了帮助，对家族性非髓样甲状腺癌其他的家系成员遗传风险评估提供了重要参考意义。此外，对其中一涉及多代多名成员发病的FNMTC大家系成员通过全基因组外显子序列捕获芯片结合高通量测序技术进行研究，结合家系连锁分析初步定位了与FNMTC发病可能相关的致病基因C14X。本项目将对致病基因A进行进一步大样本验证研究分析，包括其他家系与散发患者对比分析验证及正常人群验证。在后续的功能研究中我们根据该基因的功能将其命名为RTFC基因，在血清饥饿的条件下该基因能够促进甲状腺肿瘤细胞的细胞活力，同时也能够增强甲状腺肿瘤细胞的迁移能力。该基因R115Q, V205M 和G209D 的突变形式能够增强甲状腺肿瘤细胞的克隆形成能力并且能够促进正常甲状腺上皮细胞的转化。总之我们的研究对家族性非髓样癌的致病基因及发病机制有了深入的认识，对家族性非髓样甲状腺癌的诊断和治疗具有重要的临床意义。