复方儿茶止泻霜抗腹泻药效关系及作用机制的研究

腹泻病是由一组多病原、多因素引起的疾病，可导致大量液体和电解质丢失，引起脱水、脏器功能损害、营养不良等症，甚至导致死亡。复方儿茶止泻霜是针对小儿泄泻具有良好治疗作用的医院外用软膏制剂，经药效学试验研究，该制剂有明显抗腹泻、抑制小鼠小肠的推进功能和对小鼠腹腔毛细血管通透性增加有显著的对抗作用。虽然临床已证明该制剂对于小儿腹泻具有良好的治疗作用，但对其抗腹泻的药效关系和作用机制却未进行系统研究。.本课题将探讨建立腹泻动物模型，进行该制剂组方配伍前后的动物抗腹泻药效实验，筛选有效的止泻目标化学成分（群）；选择合适的高效液相色谱条件和方法，对不同配伍的各有效成分群进行化学成分的定性及定量分析；建立稳定的体外透皮试验方法，研究不同药味配伍对本制剂化学成分和止泻药效活性的影响，阐明儿茶等各药的抗腹泻主要有效成分及各有效成分之间协同止泻的作用机理。

复方儿茶止泻霜（以下简称CCAC）是针对湿热泻疗效确切的医院外用软膏制剂，但对其抗腹泻药效化学成分和作用机制却未系统研究。本课题主要研究了CCAC配伍前后的药效评价，筛选出有效止泻目标化学成分，进行结构鉴定；研究该制剂的药效化学成分和止泻活性的影响，从而阐明组方药材的抗腹泻主要有效成分及其协同止泻的作用机理。. 应用正交设计法优化了该制剂的制备工艺，确定了质量标准；通过该制剂组方配伍前后的动物抗腹泻药效实验，筛选出有效止泻目标化学成分（群），结果表明，CCAC水提液抗腹泻药效部位是正丁醇萃取物；运用HPLC法、HPLC-MS法、以及NMR等现代光谱技术，选用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、硅胶制备薄层色谱，以及重结晶等方法，对主要药效成分群进行了化学成分的分离纯化和结构鉴定。HPLC-MS质谱分析确定其药效部位中含有没食子酸、儿茶素、表儿茶素、小檗碱多个原单方药中相应成分，以及11种有待进一步分离鉴定的未知单一成分；首次对CCAC方药效部位进行了成分分离，得到3个已知单体成分，其中三萜皂苷化合物28-D-Gluco-pyranosyl-2α,3β,19α-trihydroxyo-lean-12-ene-24,28-dioic acid为首次在该复方中发现，组方各单味药中均未见报道。.　 采用Western blot、RT-PCR和免疫组化等方法，首次进行了CCAC水提液在mRNA 转录水平和蛋白表达水平检测其作用后目的蛋白变化，从而在细胞水平上观察了该制剂在结肠水代谢中的分子作用机制。结果表明，CCAC水提液作用于体外HT-29细胞后会上调AQP3的mRNA及蛋白表达水平，呈一定剂量依赖性；免疫组化方法检测表明，CCAC能显著减少腹泻大鼠粪便含水率，可能与上调结肠组织AQP1、AQP3的表达有关；而其通过抗炎作用抑制PGE2的合成与释放，达到保护机体免疫器官的作用，也可能是治疗腹泻的作用机理之一。该研究进一步明确了CCAC抗腹泻作用的分子生物学作用机制，为揭示其治疗腹泻分子作用机制方面的研究积累数据。. 进行了CCAC组方单味药和复方制剂的动物体、内外药效学与药动学之间相关性的研究。结果表明，该制剂的血药浓度与药物的药效之间呈良好的相关性。儿茶提取液中的儿茶素、表儿茶素含量均比CCAC液中含量高，却与临床疗效相