基于“玍毒内生-GSH/Grx失衡”假说的天珠散干预血管性痴呆及NFκB调控机制研究

明确土家族医学关于血管性痴呆的"玍毒内生，脑筋不用"病机，从"玍毒内生-GSH/Grx失衡"假说切入，采用CCA永久结扎联合孤养制备血管痴呆大鼠模型，以复杂系统熵聚堆算法对模型"认知障碍-行为-心理"相关指标、脑组织GSH、GSSG、proSSG等及海马病理变化做评估，收集"玍毒内生"表征指标。观察天珠散（TZS）对血管性痴呆大鼠认知障碍与BPSD的作用，检测海马GSH、GSSG、proSSG、Grx1含量反映细胞GSH/Grx状态，以海马神经元突触GAP-43、SYN1、MAP-2表达反映TZS对神经功能影响。培养乳鼠海马神经细胞，分别人为导致NF-κBp65完全谷胱甘肽化与巯基烷化，再施于缺氧损伤、给予TZS含药血清，观察神经元凋亡及Grx1mRNA、NF-κB表达数量，分析TZS能否通过恢复细胞GSH/ Gxr1平衡，促进NF-κB去谷胱甘肽化，发挥神经细胞保护作用。

本项目以土家族医学理论为指导，通过与中（汉）医学比较，挖掘土家族“毒气”理论关于血管性痴呆“玍毒内生，脑筋不用”病机内涵与治法方药；以天珠散为代表方剂，分别在D-半乳糖诱导的拟痴呆小鼠模型和双侧颈总动脉结扎制备的慢性低灌注型血管性痴呆模型进行了天珠散的药效评价，采用八臂迷宫、Morris水迷宫、物体识别、糖水偏嗜等行为指标进行评价，在非空间认知功能影响方面，天珠散能提高模型小鼠的辨识指数（P＜0.05）；八臂迷宫实验显示天珠散显著降低模型小鼠的参考记忆错误和工作记忆错误（P＜0.05）；Morris水迷宫实验显示天珠散降低隐藏平台获得实验中的逃避潜伏期（P＜0.05，P＜0.01），表明其具有改善模型大鼠学习记忆的作用；天珠散能降低拟痴呆小鼠脑组织GSH-Px活力（P＜0.01），提高SOD活力，显示天珠散具有抗氧化作用；H.E染色和Nissl染色显示，天珠散能明显提高模型大鼠海马组织CA1区锥体细胞数量，发挥神经保护作用；本项目还比较了大脑中动脉栓塞（MCAO）和双侧颈总动脉结扎（CCA）制备的两种血管性痴呆模型，显示CCA模型大鼠空间记忆能力下降明显，而MCAO模型记忆保持能力较差，MDA、SOD、GSH-Px代谢参与了MCAO和CCA所致血管性痴呆的病理过程，海马突触结构蛋白与反应元件结合蛋白磷酸化异常表达可能是慢性低灌注导致认知功能障碍的分子机制之一。本项目对天珠散物质基础进行初步研究，从文献水平，获得天麻抗血管性痴呆的有效成分为天麻素、对羟基苯甲醇、香草醇、香草醛等；在细胞水平，发现了对谷氨酸损伤的SH-SY5Y细胞具保护作用的头顶一颗珠（延龄草）有效部位，并经近红外光谱分析，确认了其主要成分群；采用血清药物化学方法，初步判断天珠散入血的主要成分有parishin、parishin B或parishin C、偏诺皂苷元-3-O-α- L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷等，在细胞水平，头顶一颗珠（延龄草）保护SH-SY5Y细胞的作用可能与减轻或阻止Glu损伤细胞的线粒体膜电位下降、降低[Ca2+]i水平、减少caspase3的表达，即调节细胞凋亡的线粒体途径有关。本项目已发表学术论文12篇，其中SCI收录1篇，另已接受录用2篇。