生物素-亲和素介导flk-1/KDR单抗靶向微泡评价子宫内膜容受性的超声分子显像研究

体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中，胚胎着床失败的主要原因是子宫内膜容受性不佳，目前临床尚缺乏无创、准确、实用的子宫内膜容受性评价方法。胚胎"种植窗"期子宫内膜内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体flk-1/KDR表达增加，以促进血管生成、重建、舒张以及增加血管通透性，并介导信号表达，是胚胎成功种植的必要条件。借助生物素-亲和素桥连将flk-1/KDR单抗与脂质体微泡牢固偶连，构建靶向声学造影剂，通过体外荧光检测、动物活体超声靶向显像观察靶向微泡与子宫内膜内皮细胞flk-1/KDR的特异性结合，以期建立一种新型、微创、实用的子宫内膜容受性超声分子成像评价技术。同时将生物素-亲和素桥引入靶向微泡构建系统，克服现有靶向造影剂敏感性和稳定性差的缺点，进而为改善子宫内膜容受性的载药、载基因的治疗性靶向微泡的制作提供技术支持。

研究目的 采用超声分子成像法检测子宫血管内皮表达的血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)，从而评估子宫内膜容受性。.方法 经生物素-亲和素（Bt-Av）介导，将VEGFR2单抗或同型IgG与脂质微泡偶连，分别制得抗VEGFR2靶向脂质微泡和非靶向微泡，并进行表征检测。以小鼠微血管内皮细胞(bEnd.3)为靶细胞进行体外粘附实验，比较同一区域与抗VEGFR2靶向脂质微泡和非靶向微泡结合的细胞数量比，并采用平行板流动腔法检测上述微泡的动态粘附特异性。建立不同子宫内膜容受性的动物模型，弹丸法分别给未孕组D0、怀孕D2组、怀孕D4组小鼠静脉注射靶向微泡和非靶向微泡，对小鼠子宫作高频超声成像(Vevo 2100; VisualSonics, Toronto, Canada)，记录不同孕期小鼠子宫靶向微泡和非靶向微泡的粘附信号强度，并对造影剂产生的信号定量分析；随后以免疫印迹法和免疫荧光法分别检测小鼠子宫CD31和VEGFR2的的表达。.结果 粒度仪测量制备得到的靶向微泡与非靶向微泡的粒径分别为（2.67 ± 0.30） μm和（2.47 ± 0.45 ）μm。与bEnd 3.细胞进行孵育，抗VEGFR2靶向脂质微泡的粘附明显多于非靶向微泡(9.8 ± 1.0 bubbles/cell versus 0.7 ± 0.3 bubbles/cell, P < 0.01) 。随着平行板VEGFR2孵育浓度的增高，靶向微泡的粘附逐渐增多。怀孕D2组、D4组小鼠（D2：10.5 ± 2.5 dB versus 1.5 ± 1.1 dB，P < 0.01；D4：15.7 ± 4.0 dB versus 1.5 ± 1.2 dB, P < 0.01)，未孕D0组小鼠子宫携VEGFR2的靶向微泡的粘附强度与非靶向微泡无显著性差异（1.0 ± 0.8 dB versus 0.9 ± 0.6 dB，P > 0.05）。并且怀孕D4组小鼠显著高于D2组、D0组小鼠子宫，免疫印迹法和免疫荧光法证实VEGFR2表达定位于小鼠子宫血管内皮上，并随着妊娠天数的增加，VEGFR2表达量逐渐增加。.结论 本研究以生物素法成功构建了携VEGFR2的靶向脂质体微泡，并经体内外实验证实可与小鼠血管内皮细胞靶向特异性结合，实现在小鼠模型上无创评价子宫内膜容受性。