miR-218靶向CDK6/Cyclin D1与E2F1形成负反馈调节抑制胃癌细胞增殖的研究

申请者发现miR-218在胃癌中表达明显下调。功能研究发现miR-218抑制胃癌细胞增殖，阻止细胞周期进程，可调控CDK6和Cyclin D1的表达。并且发现miR-218宿主基因SLIT2及SLIT3基因启动子均存在E2F保守结合位点，过表达E2F1能上调miR-218表达。已有研究表明SLIT2和SLIT3在多种肿瘤中存在高频率启动子甲基化。本项目拟阐明miR-218通过抑制CDK6和CyclinD1表达，抑制E2F活性，从而阻止细胞周期进程，抑制胃癌细胞增殖；阐明E2F1、miR-218、CDK6/CyclinD1形成负反馈调节环调节E2F活性。研究SLIT2和SLIT3启动子高甲基化是否通过影响E2F等转录因子的结合能力而下调miR-218的表达，从而破坏E2F反馈调节机制。本项目的实施对阐明miR-218的抑瘤功能，揭示E2F活性负反馈平衡机制及胃癌发病机制具有十分重要的意义。

我们前期研究miR-218在胃癌中下调显著。初步功能研究发现miR-218抑制胃癌细胞增殖，阻止细胞周期进程。然而miR-218在胃癌中确切的生物学功能及机制不清楚。本项目的研究目标是：1.证实miR-218能阻止细胞周期G1/S进程，抑制胃癌细胞增殖。2.证实miR-218通过调控靶基因CDK6、Cyclin D1的表达负调控E2F pathway， 阐明miR-218阻止细胞周期进程，抑制胃癌细胞增殖的分子机制。3.证实E2F1转录激活miR-218，E2F、miR-218、CDK6/Cyclin D1形成负反馈调节环调控E2F pathway，调控细胞周期进程。在本项目执行过程中，我们基本实现了上述研究目标。我们通过体内外证实miR-218抑制胃癌细胞增殖，诱导细胞G1/S期阻滞，抑制胃癌细胞生长及转移。随后机制研究发现miR-218可靶向调控CDK6和Cyclin D1表达，miR-218通过靶基因CDK6和Cyclin D1调控RB-E2F1通路活性，阻止胃癌细胞G1/S期进程，抑制细胞增殖。而E2F1又能反馈激活miR-218转录。因此，E2F1、miR-218、CDK6/CyclinD1形成负反馈调节环调节E2F活性，调控细胞周期进程。本项目最重要的发现，就是确定了E2F1、miR-218、CDK6/CyclinD1负反馈调节的存在。此外，我们首次发现在miR-26a、miR-200b/c在胃癌中发挥抑癌基因功能，是胃癌独立的预后标志。相关论文发表在Clin Cancer Res、PLos One等期刊上。培养了1名博士和2名硕士。已发表了SCI论文2篇，另有1篇论文正在发表中。