云南温泉捕食线虫真菌生物多样性研究

本项目以云南温泉捕食线虫真菌为主要研究对象，主要探讨云南温泉捕食线虫真菌生物多样性。在探索不同温度温泉中食线虫真菌分离培养方法的基础上，通过采集云南各地温泉底泥、枯腐植物残渣等基质，分离、鉴定捕食线虫真菌，获得一批菌种资源，并进行不同温泉捕食线虫真菌的物种多样性、群落相似性分析；其次，对与水、陆来源的同种捕食线虫真菌（标准菌株）的形态多样性及对线虫的捕食能力进行比较；最后，采用多序列（28S rDNA序列,ITS全序列和β-tublin1序列）综合分析方法对温泉、水生和陆生来源的同种捕食线虫真菌（标准菌株）进行系统亲缘关系分析。本项研究将有助于揭示温泉捕食线虫真菌的分布特征，发掘和保护温泉捕食线虫真菌资源，为捕食线虫真菌的相关研究尤其是线虫生防研究提供新的种质资源，也为研究这类真菌的生物进化及系统发育奠定基础。

本项目已按计划完成。研究结果显示：（1）云南省温泉资源丰富，但已开发的温泉占所调查温泉的67.6%，部分地区超过90%，温泉微生物资源的挖掘和保护已迫在眉睫。2）温泉捕食线虫真菌分离培养采用温泉水配制CMA培养基，自然pH，25~30℃培养，检出率最高，检出种类最多。（3）共分离到99株27种食线虫真菌，其中捕食线虫真菌25种，2种镰刀菌属真菌（Fusarium solani，F. equiseti），这两种菌在实验室条件下均能以孢子捕食线虫，对各期线虫都有较强的捕杀能力。发现并发表1 个捕食线虫真菌新种。产黏性菌的捕食线虫真菌占温泉食线虫真菌的71%，为优势种群。（4）20~85℃温泉中都有捕食线虫真菌分布，其中30~40℃温泉中捕食线虫真菌多样性指数（Hˊ）最高为1.85，其次是20~30℃温泉，多样性指数（Hˊ）为1.72， 50~90℃温泉中也有检出，但检出率都非常低。温度大于70℃的温泉多样性指数（Hˊ）为零。（5）不同生境的同种捕食线虫真菌在形态学、生长特性和捕食效率上存在一定差异（差异不显著）。但温泉生Arthrobotrys superb var.菌株生长速度明显慢于淡水生A. superb菌株，且 A. superb var. 菌株经数次传代线虫诱导后均未见捕食器官生成。淡水和温泉生境A.oligospora菌株对无氧环境有一定的耐受性。（6）通过构建系统发育树可看出，温泉捕食线虫真菌集中分布在Arthrobotrys属，分离温泉的A. superb var. 在ITS与β-tublin1分子序列上与A.superba都有很高的同源性（>90%），但经线虫诱导后无任何捕器产生。这在一定程度上支持了捕食线虫真菌产生的黏性菌网是营养器官分泌黏性物质形成，可能在进化地位上比较原始的假说。不同生境同种捕食线虫真菌（标准菌株）亲缘关系分析结果表明：对于A.musiformis，温泉与淡水水体及陆生来源的菌株之间ITS分子序列差异均不明显（序列差异均<1.5%）；对于A.conoides，温泉与淡水水体来源的菌株之间ITS分子序列差异非常明显（序列差异为19.8%），而温泉与陆而温泉与陆生来源的菌株之间分子序列差异则不明显（序列差异为2.4%）。另外，温泉与淡水水体、陆生菌株序列间并未发现明显的温泉特性变异位点。