CCAAT增强子结合蛋白β调控巨噬细胞功能在白介素1β诱导薄纤维帽粥样瘤形成中的作用及机制研究

Anti-IL-1β treatment is beneficial to plaque stabilizing, but the mechanism by which IL-1β triggers plaque rupture is unclear. Thin-cap fibroatheroma(TCFA), the former form of plaque rupture, which is dramatically affected by macrophage migration, apoptosis, and collagenase release is the basis of plaque rupture. CCAAT enhancer binding protein β (C/EBPβ) is a nuclear transcription factor which is highly expressed in macrophages. Our previous experiments demonstrated that C/EBPβ is involved in the formation of atherosclerosis, but whether it can induce TCFA is unclear. Pre-experiments confirmed that changes in C/EBPβ expression induced by IL-1β may significantly affect macrophage migration, apoptosis, and collagenase release. By using conditional knock-out, monocyte tracking, we aim to observe changes of TCFA formation; Through knocking out and restoring C/EBPβ expression in macrophages, combining with ChIP-seq data, we intend to elucidate involved pathway as well as mechanisms in IL-1β induced macrophage-related functional changes. Through this study, we hope to explore the role and mechanism of C/EBPβ-mediated macrophage function changes in IL-β promoting TCFA formation, and provide a new theoretical basis for prevention of cardiovascular events after myocardial infarction.

抗白介素1β（IL-1β）治疗具有稳定动脉粥样硬化斑块的功能，但IL-1β引发斑块破裂的机制并不清楚。薄纤维帽粥样瘤(TCFA)是斑块破裂的前一形态，其形成与巨噬细胞迁移、凋亡、释放胶原蛋白酶等相关功能密切相关。CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）是一种在巨噬细胞内高表达的核转录因子，我们的前期工作证明C/EBPβ参与动脉粥样硬化形成，但它是否作用于TCFA形成并不清楚。预实验证实IL-1β诱导下C/EBPβ表达的变化会直接影响巨噬细胞相关功能。本项目拟运用条件基因敲等手段，在整体动物层面观察巨噬细胞C/EBPβ缺失对IL-1β诱导TCFA形成的影响；在离体细胞层面结合ChIP-seq数据，探索IL-1β刺激下C/EBPβ对巨噬细胞相关功能蛋白调控的作用及机制，以阐明C/EBPβ介导的巨噬细胞功能变化在IL-β促进TCFA形成中的作用及机制，为防治心血管事件提供新的理论依据和干预靶点

薄纤维帽粥样瘤(TCFA)是动脉粥样硬化斑块破裂的前一形态，是造成急性心肌梗死的重要因素，但TCFA的形成原因并不清楚。CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）是一种在巨噬细胞内高表达的核转录因子，我们的前期工作证明C/EBPβ参与动脉粥样硬化形成，但它是否作用于薄纤维帽粥样瘤形成有待证明。我们的研究证实白介素1β（IL-1β）或氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导下均可导致C/EBPβ表达的上升，引发巨噬细胞吞噬能力增强、凋亡增加以及表型转换。通过使用染色质免疫共沉淀测序，我们发现ox-LDL处理后，THP-1（人单核巨噬细胞）中C/EBPβ蛋白的转录功能明显增强，通过与数据库对比，我们筛选了在动脉粥样硬化斑块进展以及TCFA形成过程中具有重要作用的炎症因子，并通过实验进一步证实C/EBPβ表达的上调以及功能的激活，可以进一步促进THP-1释放这一系列的炎症因子。这些结果均提示C/EBPβ表达上调引起的巨噬细胞功能转变可能是TCFA形成的重要原因。在动物水平上，我们证实C/EBPβ在动脉粥样硬化斑块中的巨噬细胞中表达上调，同时我们检测动脉粥样硬化小鼠的体重、血压、脉搏波传导速度的变化以及检测了血脂、血糖、炎症因子水平。目前我们已经构建C/EBPβ巨噬细胞的条件性敲除小鼠，并与AopE-/-小鼠杂交后，获得了C/EBPβ条件性双敲小鼠。我们的这些研究成果可能为TCFA的药物治疗提供潜在的靶点。