TNIP1/ABIN1调控树突状细胞NF-κB炎症通路在重症肌无力胸腺致病机制中的作用研究

Our recent study showed that: (1)The density of mDCs increases significantly in thymus medulla of MG patients,especially gathering around or in the ectopic GC.The mDCs in thymic hyperplasia express more co-stimulator (CD80, CD86) than those in normal thymus, indicates that mDC may play an important role in the formation of ectopic GC in the hyperplasia thymus,thus involves in the disease process. (2) The reduced level that we found in mRNA expression of TNIP1, a negative regulator of NF-κB signaling pathways, in the DC from myasthenia gravis hyperplasia thymus provide a clue about how the mDC be activated and participate in the pathogenesis of myasthenia gravis. According to these findings,we use immunofluorescence and Flow cytometryto detect the activation of mDC; and at the level of transcription and translation, we use real-time PCR and western bloting to detect the expression of NF-κB p65 and TNIP1/ABIN1.ELISA is used to detect inflammatory cytokines, such as IL-6 and IL-1. Moreover, we use RNA interference and TNIP1-knockout animal model to clarify the effect of the regulation of NF-κB by TNIP1 in the control of mDC activation. After these research finished, we want to discover some new targets for the treatment of MG.

前期研究我们证实:(1)重症肌无力（MG）患者增生胸腺髓质中髓样树突状细胞（mDC）密度高于对照组，且在异位生发中心中mDC的分布更密集，mDC表达共刺激分子CD80和CD86明显增多，提示活化和成熟的mDC在MG胸腺“病灶”的形成和维持中起重要作用。(2)负调控NF-κB活化的肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白 1(TNIP1)基因在MG患者胸腺中表达降低，且在DC中显著减少，推测与mDC活化成熟及分泌过量炎症细胞因子有关。本研究拟对MG患者mDC的活化状态和炎症细胞因子含量、NF-κB p65及TNIP1（ABIN1）负调节因子mRNA和蛋白的表达进行研究，同时利用体内RNA干扰技术和体外动物实验明确TNIP1对NF-κB的调控在抑制DC活化中的作用，为MG治疗提供新靶点。

目前普遍认为胸腺组织是重症肌无力发病的起始部位，是AChR自身致敏和产生AChR-Ab致病抗体的主要场所。正常人胸腺组织随着人年龄的增长功能逐渐退化，对于正常胸腺组织中树突状细胞的数量（密度）随年龄的变化进行研究是一个了解重症肌无力增生胸腺组织发生原因的重要研究背景，我们的研究显示与胸腺实质的缩小不一致，胸腺实质中 DC 亚群的密度随着年龄的增长始终保持在恒定水平用来保持高效的自身反应性胸腺细胞筛选功能。随着衰老胸腺pDC密度的增加意味着胸腺中DC还有中枢耐受外的其他功能。而在重症肌无力的增生胸腺中我们发现髓样树突状细胞（myeloid dendritic cell，mDC）和浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cell，pDC）在胸腺皮质和髓质均有分布，但大多数分布于髓质区，且倾向于集中分布在皮髓质交界处。MG患者增生胸腺的髓质中mDC密度高于对照组，且在异位生发中心中mDC的分布更密集。此外，MG胸腺中的mDC表达共刺激分子CD80和CD86明显增多，提示活化和成熟的mDC可能在MG胸腺“病灶”的形成和维持中起重要作用。对MG患者外周血DC的研究我们也发现MG患者的pDC/mDC比值的平均值较健康人低，pDC在MG患者外周血中绝对数量降低。MG患者的mDC处于更加活化的状态，但pDC却未表现出明显的活化倾向。可见mDC在MG发病中起重要作用。进一步研究发现，MG患者外周血和胸腺表达TNIP1/ABIN1的量减少，且其中mDC也可能存在TNIP1/ABIN1的表达量减少。TNIP1/ABIN1是负调控NF-κB炎症信号通路的重要的“刹车基因”。我们的研究也发现MG增生胸腺NF-κB炎症通路相关分子的表达量及活化水平升高，其下游的炎症细胞因子表达水平也高于对照组胸腺，预示着TNIP1/ABIN1可作为免疫抑制的一个调节点，可能参与了MG的发病，因此ABIN1-NF-κB通路在MG的致病机制上可能起到一定的作用。