树突状细胞NF-κB/IL-23信号通路在慢乙肝及慢加急肝衰竭中的作用及机制

The major cause of liver failure is acute-on-chronic liver failure in chronic hepatitis B(CHB) patients in China. Therefore, it is meaningful to study immunological mechanisms of liver failure in CHB patients for improving CHB prognosis. Some research found Th17 cells may contribute to the disease progression and pathogenesis of acute-on-chronic hepatitis B liver failure. However, Th17 differentiation depends on the recent discovery of IL-23, produced by dendritic cells(DCs). Nuclear factor κB (NF-κB) play an important regulatory role in IL-23 upstream. The previous study of our group showed that DCs of chronic severe hepatitis B patients had mature defection, the expression of TLR4 and NF-κB were up-regulated, the productions of IL-6 and IL-12 were increased, and all of them associated positively with the illness severity, comparing with other CHB patients. It may be one of the major factors, which lead to exacerbation of liver inflammation and development of severe hepatitis. Thus, we plan to study the secretion of IL-23, produced by DCs, the activation of NF-κB, the transcription and expression of inflammatory cytokines, including IL-23, in immune tolerant phase, immune clearance phase and acute-on-chronic liver failure CHB patients, in order to explain effect and mechanism of dendritic cells' NF-κB/IL-23 pathway in chronic hepatitis B and acute-on-chronic liver failure patients.

我国肝衰竭的主要病因是在慢乙肝基础上发生慢加急性肝衰竭，因此研究影响慢乙肝急性发作及肝衰竭的免疫学机制对改善慢乙肝预后有重要现实意义。业已发现Th17与慢乙肝肝衰竭的发生有重要关系，而Th17的分化需新近发现的主要由树突状细胞（DC）产生的白介素23参与，核因子κB在其上游起重要调节作用。我们前期研究发现慢性乙型重型肝炎患者DC成熟障碍，与慢乙肝相比，TLR4和NF-κB表达上调，IL6和IL12分泌增加，且与疾病严重程度相关，是加剧慢乙肝炎性反应致重型肝炎的重要因素。因此，本课题拟对慢乙肝免疫耐受期和免疫清除期及慢加急肝衰竭患者的DC分泌IL23的免疫应答状况，以及不同免疫状态的DC在NF-κB活化和抑制时IL23等炎症因子转录及表达差异进行体内外观察研究，以期阐明树突状细胞NF-κB/IL23通路在慢乙肝及慢加急肝衰竭中的作用及机制，进而为慢乙肝及慢加急肝衰竭患者寻找新的免疫治疗靶点。

慢加急性肝衰竭主要是指在慢乙肝基础上发生的急性肝衰竭，因此研究其免疫学机制对改善肝衰竭的预后有重要现实意义。本课题中我们假设慢乙肝和慢加急肝衰竭患者的 DC 分泌 IL-23 的免疫应答不同，不同状态的 DC 导致 TLR 下游NF-κB 活化，IL-23 及其相关因子转录及释放存在差异，而HBV-ACLF患者因为IL-23 上调，导致 Th17 的分化和应答增强，从而促进了HBV-ACLF的发生发展。本课题的主要研究内容包括三部分：1 HBV感染不同分期以及HBV-ACLF患者存活组与非存活组中血清IL-23及相关细胞因子的比较；2 HBV-ACLF患者树突状细胞中IL-23的水平及其与疾病进展的关系；3 HBV-ACLF患者树突状细胞HMGB1/IL-23信号通路的变化研究。结果发现，血清IL-23及其相关因子（IL-12、IL-17、TNF-α和IFN-γ）水平在HBV-ACLF组显著高于HCs组、IT组和IC组（P均< 0.05），非生存组血清IL-23、IL-17、IL-6、IL-12p70和TNF-α表达水平明显高于生存组患者（P均< 0.05）。进一步在PBMCs诱导分化而来的MoDC中发现IL-23mRNA和IL-23R mRNA的表达在HBV-ACLF组显著高于IC组、IT组和HCs组（P 均< 0.05），经流式检测IL-23和IL-23R蛋白水平的表达亦可见相似的结果（P 均< 0.05）。且HBV-ACLF患者MoDCs中IL-23的表达水平与MELD评分、PT、INR和TBIL分别呈正相关（P 均< 0.05）。为进一步探索IL-23的信号通路，我们检测了HMGB1在HBV感染不同时期的表达。结果显示，HBV-ACLF组血清中HMGB1的表达显著高于IC组、IT和HCs组，且HBV-ACLF非生存者血清HMGB1显著高于生存组（P均< 0.05）。且随着HMGB1剂量的增加，MoDCs刺激CD+T细胞增殖的能力降低。HBV-ACLF组MoDCs中HMGB1和NF-κBp65的表达显著高于IC组、IT组和HCs组。通过对NFκBp65过表达/干扰，我们发现HMGB1能够调控MoDCs中IL-23的表达。在本项目经费的资助下，课题组顺利完成了既定计划，并进行了深入探索，为HBV-ACLF免疫学机制的阐明及基于细胞因子治疗的研究打下了扎实基础。