涎腺多形性腺瘤种植性生长与蛋白多糖分泌的关系探讨

涎腺多形性腺瘤在临床上具有种植性生长的特征，其机理尚不清楚。涎腺肿瘤性肌上皮细胞（neoplastic myoepithelial cells,NMCs）具有合成分泌蛋白多糖（proteoglycans,PG）的功能，本研究拟采用RNA干扰技术沉默多形性腺瘤中NMCs木糖基转移酶（XT-I）和（XT-II），阻抑PG生物合成。将阻抑前后的肿瘤细胞种植在组织工程化纤维组织支架上生长，植入裸鼠体内生长。观察PG阻抑后对肿瘤种植性生长的影响，探讨涎腺多形性腺瘤种植性生长与肿瘤PG分泌的关系。

唾液腺多形性腺瘤是最常见的唾液腺肿瘤，在临床上具有“好复发、易种植”的生物学行为。肿瘤中的肌上皮细胞具有合成分泌蛋白多糖的功能，蛋白多糖与肿瘤的生物学行为有何关系？目前尚不清楚。.本课题采用RNA干扰技术，构建沉默蛋白多糖生物合成过程中关键的起始酶——木糖基转移酶（XT-I和XT-II）基因的质粒载体，通过腺病毒包装，Ad-shRNA-WJ4（Ad-shRNA-XT-I）和Ad-shRNA-WJ7（Ad-shRNA-XT-II）。体外原代培养患者唾液腺多形性腺瘤细胞，传代，鉴定。在将同一患者肿瘤包膜的成纤维细胞培养，鉴定后，接种在脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix，ADM）支架上，构建组织工程化纤维组织。分别将Ad-shRNA-XT-I和Ad-shRNA-XT-II转染多形性腺瘤细胞，分为沉默组（转染组）、空载体组、未转染组。采用Real-time PCR检测XT-I和XT-II基因的相对表达量、采用Wester blot检测XT-I和XT-II的蛋白相对表达量、采用蛋白多糖检测试剂盒检测蛋白多糖含量。结果发现，沉默组的XT-I和XT-II基因和蛋白相对表达量以及蛋白多糖的含量均明显下降，与其他两组相比较，差别有显著性。沉默组、空载体组和未转染组细胞的Transwell小室的侵袭性实验和细胞划痕的迁移性实验表明，XT-II基因沉默后，蛋白多糖分泌下降，多形性腺瘤细胞的侵袭力和迁移能力均明显下降，差别有显著性。分别将XT-I和XT-II基因的沉默组、空载体组和未转染组细胞接种于同一患者的组织工程化纤维组织上生长，再种植于裸鼠体内生长3个月。研究发现，沉默组未见肿瘤种植性生长；空载体组和未转染组可见肿瘤种植性生长。.研究结论表明：.1、成功建立“一种组织工程化人涎腺多形性腺瘤活体组织模型的建立方法”，获得发明专利1项。.2、成功构建靶向沉默木糖基转移酶（XT-I和XT-II）基因的质粒载体，通过腺病毒包装，有效转染唾液腺多形性腺瘤细胞。.3、独立或联合沉默木糖基转移酶（XT-I和XT-II）基因，有效阻抑唾液腺多形性腺瘤或腺样囊性癌的蛋白多糖的生物合成。.4、蛋白多糖生物合成受阻后，唾液腺多形性腺瘤的迁徙性、侵袭性、种植性生长的恶性生物学行为受到明显的抑制。