miR-195靶向LRP6调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移及健脾解毒方对其作用的研究

The prognosis of colon cancer (CC) is critically affected by tumor cell invasion and metastasis, a process in which wnt/beta-catenin signaling pathway plays a major role, and is often targeted by therapies. But how beta-catenin signaling is regulated remains unclear, thus makes it hard to develop any meaningful therapeutic approach. Our preliminary data uncovered a negative correlation between the expression levels of upstream receptor LRP6 and miR-195; Jianpi Jiedu Recipe upregulated miR-195 expression, repressed beta-catenin signaling, consequently inhibited CC cell invasion and metastasis. We hypothesize that a miR-195-LRP6-wnt/beta-catenin signaling axis may mediate CC metastasis. We propose to use LRP6 3 'UTR reporter construct, miR-195 lentiviral vector, to study the underlying mechanism of this signaling cascade, and elucidate how Jianpi Jiedu Recipe affects it. This study of ours will shed light on the mechanisms by which CC cells metastasize and identify novel therapeutical targets for TCM.

侵袭转移是影响大肠癌预后的重要因素，Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌侵袭转移中起重要作用，成为肿瘤治疗的重要靶点。但Wnt/β-catenin信号通路的调控机尚不清楚，为临床防治带难题。 前期研究发现细胞膜上的Wnt信号通路的受体LRP6和miR-195表达呈负相关，健脾解毒方能抑制大肠癌侵袭转移，上调miR-195，抑制β-catenin信号通路。我们推测miR-195可能靶向LRP6调节Wnt/β-catenin信号通路是大肠癌侵袭转移的重要途径之一。因此，本研究构建LRP6 3'UTR报告基因、miR-195慢病毒载体，研究miR-195靶向LRP6调控β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移的机制，并深入探讨健脾解毒方对miR195- - LRP6- - β-catenin生物信息传递的调节机制。这对于揭示大肠癌侵袭转移的机制，明确中药防治大肠癌的靶点具有重要的科学意义。

侵袭转移是影响大肠癌预后的重要因素，Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌侵袭转移中起重要作用，成为肿瘤治疗的重要靶点。但Wnt/β-catenin信号通路的调控机尚不清楚，为临床防治带难题。本项目通过体外细胞实验和体内动物实验，探索miR-195靶向LRP6调控β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移的机制，并进一步揭示健脾解毒方对miR195-LRP6-β-catenin生物信息传递的调节机制。研究结果显示，miR-195在人大肠癌癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织，而其靶基因LRP6在人大肠癌癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织。相关性分析提示，LRP6的表达与miR-195的表达呈显著负相关，提示miR-195和LRP6与大肠癌的发生发展密切相关。进一步的分子机制研究提示，miR-195通过LRP6调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大肠癌细胞侵袭转移的能力。体内实验也证实，miR-195能够显著抑制大肠癌皮下移植瘤的生长和大肠癌细胞的肝肺转移，并且能够显著下调LRP6的表达和抑制Wnt/β-catenin通路的激活。另一方面，体内外实验也表明，健脾解毒方能够剂量依赖性地抑制大肠细胞原位移植瘤的生长和肝肺转移，提示其良好的抗肿瘤生长和抗转移效果。进一步的作用机理研究表明，健脾解毒方通过miR-195靶向LRP6调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大肠癌侵袭转移。本研究充分表明，miR-195等短链非编码RNA在大肠癌的发生发展中有着非常关键的调节作用，同时健脾解毒方的抗肿瘤作用跟调节非编码RNA的表达有着重要的联系。本研究成果为健脾解毒方广泛应用于临床大肠癌的防治奠定了非常扎实的实验基础。