卵泡期中后段梅山与杜洛克猪卵泡间差异表达基因的分离研究

排卵数是窝产仔数的第一个决定因素。中外猪种在发情期排卵数差异显著，这是产仔数差异的重要原因，但目前其分子机理尚不完全清楚。高排卵数与低排卵数品系（种）母猪的排卵数差异源于其在卵泡期中后段卵泡发育动力学的差异。卵泡选择和成熟的动态变化受高度同步、精确的基因表达调控, 梅山与杜洛克母猪在排卵数上的差异可能是其卵泡中基因差异表达的结果。本研究将利用抑制消减杂交技术从基因转录水平研究卵泡期中后段两猪种中等卵泡M1（直径3.0mm-4.9mm）之间、中等卵泡M2（直径5.0mm-6.9mm）之间和大卵泡（直径≧7.0mm）之间差异表达的基因，构建3对消减文库，分离、鉴定、克隆品种间差异表达的基因，研究其发育性和组织表达规律，进行SNP研究，分析其功能，探讨其对猪排卵数与繁殖性状的影响，为深入研究影响猪排卵数相关性状的分子机理、调控网络并发现新的分子标记打下基础，具有重要的理论价值和广阔的应用前景。

排卵数是窝产仔数的第一个决定因素。高排卵数与低排卵数品系（种）母猪的排卵数差异可能源于其在卵泡期中后段卵泡发育动力学的差异。卵泡选择和成熟的动态变化受高度同步、精确的基因表达调控。本项目从基因表达差异的角度来研究影响中外猪种排卵数差异的分子基础。. 利用抑制消减杂交技术构建了卵泡期第4天梅山与杜洛克经产母猪大卵泡（直径≧7.0mm）之间、中等卵泡M2（直径5.0mm-6.9mm）之间及中等卵泡M1（直径3.0mm-4.9mm）之间的消减文库。克隆测序得到281个非冗余ESTs，其中231个代表了已知的基因，44个与未命名序列高度同源，5个未找到同源序列。经GO分析和pathway分析，发现8个基因为TGF-β通路基因，6个为PI3K-Akt通路基因，3个类固醇合成通路基因、4个卵母细胞减数分裂通路基因。通过差异显示技术，分离了13个在梅山与杜洛克猪卵巢间差异表达的基因，其中9个代表了已知基因，4条未找到同源序列。对部分ESTs进行了Real-time PCR分析，表明大部分EST在梅山与杜洛克经产母猪同级卵泡间为差异表达，在不同级别卵泡之间的表达量也存在差异。经半定量RT-PCR检测，多数基因在各组织广泛表达，Grb14与ARF3在生殖器官表达但在多数其他组织未检测到表达。通过序列比对，查找到SNP位点15处。通过电子PCR结合SMART-RACE实验获得YWHAG等基因的CDS全长序列。. 研究结果表明，在卵泡期中后段，TGF-β通路、PI3K-Ak通路、类固醇生物合成通路、卵母细胞减数分裂通路基因在梅山与杜洛克猪卵泡间的表达差异，是影响猪卵泡发育与成熟排卵的重要原因。本研究为进一步解析猪卵泡发育与排卵数量控制机理打下了基础。.