针刺对脑缺血大鼠损伤相关miRNA及可能靶蛋白的调节作用

The experiment is focus on the effect of acupuncture on the expression of injury related miRNAs and possible targeted proteins on rats subjected to cerebral ischemia reperfusion injury. Male SD rats was induced MCAO model ,then randomly divided into six groups: control group, sham group, model group, Electro-acupuncture on "ST36" and "DU20 " group, "DU20" group, Edaravone group. Except control and sham group, the others have 4 small groups according to different time points at 1h, 6h, 24h and 48h.7 rats for each group. We explored the expression of miR21、miR497、miR320、miR29c in rats brain and blood by quantitative PCR. The possible targeted proteins MMP-9,APQ4,bcl-2/bcl-w，Faslg will be detected by the way of immunofluorescence.The prospects is to search and identify some bio-markers of miRNAs and proteins, which appearing in ischemia stroke after acupuncture therapy,further to explore the effect of acupuncture on ischemic stroke.And hope these experiments can offord guidance for clincal ischemic stroke therapy.

探讨针刺百会、足三里穴对脑缺血再灌注大鼠损伤相关miRNA及可能靶蛋白的调节作用。雄性SD大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型，采用随机数字表法将大鼠分成空白对照组、假手术组、模型组、电针组、百会组、依达拉奉组。除了空白组及假手术组外，其余各组大鼠分1h、6h、24h、48h 4个时间点,每组7只大鼠。每组动物分别观察动物的神经功能评分，免疫荧光法检测脑组织MMP-9、APQ4、bcl-2／bcl-w，Faslg表达情况，同时用实时荧光定量PCR法检测脑组织和血中的miR21、miR497、miR320、miR29c表达。预期可寻找并鉴定一批针刺治疗缺血性脑血管病的miRNA类和蛋白质类的生物标识分子，进一步探讨针刺治疗缺血性脑血管病的作用机制，为针刺治疗缺血性脑血管病提供实验理论依据，更好地指导临床实践。

研究背景：.脑卒中具有较高的发病率，致残率和致死率，造成了严重的社会负担，已成为脑缺血性疾病有效防控的亟待解决的问题。脑缺血再灌注损伤主要与炎症反应、能量代谢障碍、氧化应激导致的脂质过氧化物反应、兴奋性氨基酸的毒性作用及细胞凋亡等因素有关，但其发病机制尚不确切，缺乏有效的干预措施。针刺疗法作为补充和替代治疗脑血管病的手段之一，对脑血管病后导致的功能障碍取得了较好的疗效。.本项目采用大鼠脑缺血再灌注模型，主要从脑缺血再灌注损伤的炎症反应、血脑屏障结构破坏、脑内水代谢变化、氧化应激、细胞凋亡及神经血管再生等多种病理机制为切入点，探讨针刺百会、足三里穴对其的干预作用及验证针刺对缺血性脑损伤的保护作用。.研究内容：.制备线栓法大鼠脑缺血模型，根据再灌注后时间分为不同时间点，观察针刺百会、足三里穴对大鼠炎症反应、血脑屏障及脑水肿相关分子MMP-2、AQP4、ZO-1、Occludin、Claudin-5、miRNA-29、miRNA-320的表达情况；氧化应激相关分子SOD、MDA表达变化及细胞凋亡情况；神经血管再生相关分子miRNA-126、miRNA 124、VEGF、intergrin β1及laminin表达，并分析其动态变化及其相互关系分子的表达变化、脑梗死体积及神经功能缺损恢复情况等。.重要结果：.针刺百会和足三里穴可减轻脑缺血早期炎症反应、减轻氧化应激损伤及细胞凋亡、通过调节细胞外基质及水代谢等保护缺血区脑组织，多途径、多靶点减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损和缺血性脑损伤，对血脑屏障损伤有保护作用。 .科学意义：.为针刺治疗缺血性脑血管病进一步提供了理论和实验依据。发表相关学术论文12篇，其中SCI论著4篇，被SCI收录的文献引用14次（他引9次），中文核心论著8篇，共计被引用79次（他引62次）。本项目培养研究生4名，参加会议6次。获得“2016年度中国针灸学会科学技术奖二等奖”。