针刺百会、足三里穴对急性脑缺血大鼠的抗炎调控作用

探讨针刺百会、足三里对急性脑缺血大鼠的抗炎信号的调控作用。选择急性缺血性脑血管病"炎症"假说中分子靶标粘附分子-1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及其"细胞外基质破坏"假说中的分子靶标基质金属蛋白酶-9（MMP-9），观察针刺作用机制。雄性SD大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型，采用随机数字表法把大鼠分成六组。每组又分12h、24h、48h、72h四个时间窗。电针组针刺百会、足三里穴；针药结合组为电针联合尼莫地平治疗。采用免疫组化法检测脑组织MMP-9、ICAM-1、TNF-α表达情况；同时用原位杂交法检测MMP-9。并取动物的脑组织进行TTC染色，观察脑组织缺血的面积，验证模型成功。通过与尼莫地平的比较来验证针刺百会、足三里的疗效和分子作用机制；探讨针刺和尼莫地平对脑缺血大鼠是否具有协同的作用。这一整体性研究将为针刺治疗缺血性脑血管病提供多系统分子作用机制的实验依据。

根据卫生部《2010中国卫生统计年鉴》，脑血管病已成为我国居民的第二位死因，发病率、死亡率和致残率均较高。长期以来，针刺治疗脑缺血性疾病的临床和基础研究均取得了一定的进展。本研究采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型，检测中枢相关脑区炎症损伤信号链中的炎性相关因子基质金属蛋白酶（MMP）-9、细胞间粘附分子（ICAM) -1、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α及外周血中的IL-1β、IL-6、TNF-α和损伤应激信号热休克蛋白（HSP）70表达的变化。将大鼠随机分为正常对照组（N）、假手术组（J）、模型组（M）、针刺组（A），每组再根据再灌注后时间分成12h、24h、48h、72h、96h和144 h 6个时间点。应用TTC 染色、HE染色法验证模型，用免疫组织化学技术和酶联免疫吸附测定法（ELISA）分析中枢脑区和外周血清炎性相关信号的表达，同时应用表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱技术分析外周血中相关蛋白信号表达的差异。ELISA结果显示针刺组各个时间点外周血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达低于模型组。实验各组大鼠外周血清HSP70表达均高于正常对照组，针刺组HSP70表达峰值较模型组延后，72h后表达降至基线水平，且表达量低于模型组。免疫组化染色结果显示假手术组和模型组，正常对照组和模型组，针刺组和模型组相比，ICAM-1、MMP-9、IL-1β、IL-6和TNF-α表达均有显著差异。针刺组与模型组比较，ICAM-1、MMP-9、IL-1β呈双峰表达，表达第一峰的峰值降低，第二峰表达时间提前，TNF-α、IL-6为单峰表达，针刺组较模型组峰值降低。本研究表明针刺百会和足三里穴可抑制中枢损伤脑区损伤相关的炎性细胞因子表达，促进损伤-修复相关的细胞因子表达，使修复时相前移，加速损伤修复；针刺百会和足三里穴对机体宏观生理功能调节网络的影响可能是通过对损伤对侧脑和全身的功能调节，降低免疫系统对中枢局部脑组织损伤的炎症应答，促进损伤修复信号链活化。本课题共发表文章11篇，培养研究生4名，参加国内外学术会议5次。