针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠相关神经血管再生机制的研究

The experiment is focused on the effect of acupuncture at GV20 and ST36 associated with neurovascular regeneration on rats subjected to cerebral ischemia reperfusion injury(CIRI). Male SD rats were induced MCAO model, and randomly divided into five groups：sham-operated group(S), model group(M), acupuncture at ST36 and GV20 group(A), electro-acupuncture group at ST36 and GV20 group(EA), and drug group(D). Except group S, the remaining groups were further divided into 1d, 3d, 5d, 7d, and 14d subgroups according to the different reperfusion times, 10 rats in each group. Detect neurological score and behavioral changes of animals in each group; Explore the expression of PTX-3, Casp-1, TSPO, HIF-1α, BDNF and VEGF protein in brain by Immunohistochemistry，immunofluorescence and Western Blot; Observe neural regeneration using BrdU, BrdU/DCX staining; Test the expression of the above corresponding mRNAs，miRNA-210 and miRNA-124 using real-time quantitative PCR. We expect to find the assosiation between cerebrovascular inflammation and neurovascular regeneration on the levels of gene and protein, and further to explore the effect of acupuncture on cerebral ischemia. And hope these experiments can offer better guidance for the recovery of clincal ischemic stroke patients.

探讨针刺百会、足三里穴对脑缺血再灌注损伤相关的神经血管再生作用。雄性SD大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型，采用随机数字表法将大鼠分成假手术组、模型组、针刺组、电针组、药物组。除了假手术组外，其余各组大鼠再分1d、3d、5d、7d、14d 5个时间点,每组10只。分别观察动物的神经功能评分及行为学；采用免疫组化、免疫荧光及免疫印迹法（WB）检测脑组织PTX-3、Casp-1、TSPO、HIF-1α、BDNF及VEGF蛋白的表达情况；同时用实时荧光定量PCR法检测脑组织相应的mRNAs、miRNA-210、miRNA-124的表达。并采用BrdU及BrdU/DCX染色观察神经血管再生的情况；预期在基因和蛋白水平验证针刺百会、足三里穴具有对脑缺血再灌注损伤后神经血管的修复再生作用，进一步探讨针刺治疗缺血性脑血管病的作用机制，为针刺治疗缺血性脑血管病提供实验理论依据，更好地指导临床实践。

研究背景：.缺血性脑卒中在我国的发病率、致残率及致死率均较高，脑卒中后的神经功能缺损严重影响了患者的生活质量，也造成了严重的社会负担。促进中枢受损神经元的再生修复，促进其神经功能恢复，提高患者生存质量，是目前脑血管病研究的重点。针刺是脑卒中后功能康复的主要方法，然而，其潜在的机制仍不清楚，因此本研究围绕针刺对缺血性脑血管病作用机制开展研究。.本项目以大鼠脑缺血再灌注模型为研究对象，主要从脑缺血再灌注损伤的神经血管再生、炎症反应、细胞凋亡、线粒体功能及自噬等多种病理机制为切入点，探讨针刺百会、足三里穴对其的干预作用及验证针刺对缺血性脑损伤的保护作用。.研究内容：.以激光多普勒血流仪（LDF）检测颅骨表面大脑中动脉相应分布区的血流变化，复制了稳定的线栓法大鼠脑缺血模型，根据再灌注后时间分为不同时间点，应用神经生物学染色及相应的免疫组织化学（IHC）、免疫印迹（WB）、实时荧光定量PCR（qPCR）等检测手段，观察针刺百会、足三里穴对大鼠行为学、神经血管再生机制、炎症相关机制、内质网应激介导的细胞凋亡、EPO介导的 JAK2/STAT3 细胞信号通路、线粒体功能损伤及线粒体自噬影响的作用，探讨针刺干预脑缺血再灌注损伤的病理机制。.重要结果：.针刺百会和足三里穴可以减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的炎症反应、改善硝化/氧化应激诱导的线粒体损伤，同时通过Pink1/Parkin介导的线粒体自噬途径清除损伤线粒体的积累，减轻脑缺血-再灌注过程中神经元损伤，减少细胞凋亡，促进神经血管再生，明确了针刺具有减轻缺血性脑损伤，并促进脑缺血大鼠行为学的改善。.科学意义：.本研究科学上取得重要进展，学术上属国内外先进水平，为针刺治疗缺血性脑血管病进一步提供了理论和实验依据。本研究培养博士研究生5名，发表相关学术论文6篇，其中SCI论著3篇，多次在国内外学术会议进行报告与学术交流。