类核苷免疫调节剂CH通过iNKT细胞干预类风湿关节炎的机制研究

Rheumatoid athritis (RA) is an complicated autoimmune disease which the main pathophysiological role is unbalanced immune network and undue inflammation .There is still lack of effective drugs for cure of RA up to now. Recently, researchers suggest that iNKT cells play an important role in pathophysiological process of RA,but the mechanism on the patholgenic role of iNKT cells in RA is incompletely understood.We discovered in our previously experiments that the novel synthetic C-Pseudonucleosides Bearing Thiazolidin as immunostimulants（CH） have the capability of promoting the proliferation of iNKT cells, booting cytotoxic function, enchancing the expression of IL-4, furtherly, they can alleviate the clinical symptoms of CIA mice, up-regulate the population of iNKT in CIA mice.On these background, we suppose that the immunostimulants exert theraputic effect by activating iNKT cells in RA . We are planning to investigate the mechanism of immunostimulants in activation and molecule recognition to iNKT cells,to explore the effects of immunostimulants on key proteins and signal transduction pathway in RA relying on iNKT cells. The cellular and molecular biological technologies will be used to research the function of iNKT cells in CIA mice . It will be significant to provide the relationship beteen iNKT and RA,then supply an new strategy for treatment of RA.

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种病因复杂的自身免疫病，其核心是免疫失衡和过度炎症反应,目前仍缺乏特效药。近期研究发现：iNKT细胞与RA发生密切相关，但机制尚不完全明确。本课题组研究发现，前期合成的噻唑烷酮类核苷免疫调节剂CH能有效缓解RA小鼠的临床症状，并上调iNKT亚群比率、增加IL-4分泌。据此推断CH对RA的作用可能与iNKT细胞有关。本项目拟在原有工作基础上使用实验小鼠和部分临床标本，采用细胞和分子生物学手段，研究CH对iNKT细胞的增殖、活化和免疫调节功能的影响；确定iNKT细胞对CH的识别方式和细胞活化通路；进一步通过构建RA模型，观察小鼠临床症状、关节病理以及免疫应答格局的变化；比较RA中关键分子的表达差异，旨在从整体、细胞及分子水平上系统验证CH通过iNKT干预RA发病的机制，为RA治疗提供新的思路。

iNKT细胞是一群具有双向免疫调节功能的特殊T细胞亚群，与类风湿性关节炎（RA）的发生和发展密切相关。活化的iNKT细胞究竟是促进Th1型致炎因子还是介导Th2 型抑炎因子生成，关键取决于激活剂的属性和实验模型。本研究分别应用临床标本和RA实验小鼠观察iNKT细胞的频率与功能变化，探讨其对免疫失衡及炎症的影响，阐明iNKT细胞参与RA病理过程的机制。通过观察iNKT细胞的增殖、IFN-γ、IL-4含量（以及IFN-γ mRNA和IL-4 mRNA表达）和IFN-γ/IL-4比值变化，明确核苷免疫调节剂CH1和CH2对iNKT免疫调节功能的影响；采用CD1d抗体阻断法探寻iNKT细胞对CH1b、CH2b可能的识别方式和活化信号通路；通过观察CH1和CH2对RA的小鼠发病的影响，揭示其作用机制。 结果发现，（1）RA患者（活动期和稳定期）体内iNKT细胞频率与血清IFN-γ/IL-4比值呈负相关；与体外PBMC培养上清中IFN-γ/IL-4比值也呈负相关。（2）iNKT细胞对CH1b、CH2b的识别及功能活化可能与TCR-CD1d依赖途经相关；CH1b、CH2b有可能通过激活转录因子GATA-3 通路调节iNKT分化方向，促进IL-4分泌以形成Th2倾向、从而对RA机体进行定向免疫调节。（3）CH1b、CH2b 干预 RA小鼠是通过刺激iNKT细胞的增殖和定向分化，纠正免疫紊乱与炎症反应实现的。 因此，CH1b、CH2b是极具应用潜能的iNKT细胞激动剂，有可能成为今后开发靶向iNKT细胞的RA免疫治疗的工具。