iNKT细胞调控肝移植排斥反应的作用与机制研究

Allograft rejection is understood as one of the main reason limiting the outcome of liver transplantation. iNKT cells are important liver resident cells. Previous studies showed that iNKT cells play an important role in immune regulation. Our preliminary study found that iNKT cells in the liver perfusion fluid showed numerical and functional differences in patients with different immediate transplant outcome. Thus, we propose iNKT cells involved in regulation of liver microenvironment and may play a key role in transplantation rejection. In this study, we intend to use flow cytometry, functional study and bioinformatic analysis of iNKT cells to examine the role of iNKT cells in the transplantation rejection setting. Our key scientific questions are: 1) The role of peripheral and resident iNKT cells in acute rejection 2) Regulatory mechanism of iNKT cell on CD4 T cells in liver transplantation rejection 3) The regulatory mechanism of iNKT cells on liver immunology. Overall, we hope to reveal the role of iNKT cells on liver immune microenvironment and to provide the theoretical basis for using iNKT cells as a therapeutic target.

移植排斥是制约肝移植疗效的主要原因之一，细胞免疫是介导其发生的主要机制。iNKT(I型NKT)细胞是肝脏免疫系统的固有细胞。前期研究表明，iNKT细胞在免疫调控中发挥着重要作用。我们进一步研究证实：术后出现不同排斥反应的患者，其供肝灌注液中iNKT细胞量与功能均呈现显著差异，由此我们提出：iNKT细胞参与介导肝移植排斥反应，且可能在其中起关键作用。本项目拟采用流式细胞学，细胞功能学及基因型分析对外周血以及肝脏iNKT细胞进行分析筛查，旨在获得iNKT细胞与移植排斥反应直接相关的可靠证据。本项目拟解决以下关键科学问题：1）明确iNKT细胞在排斥病人外周血及肝脏中的亚群与功能 2）阐明iNKT细胞群在肝移植排斥反应中对CD4T细胞的调控机制 3）探索iNKT细胞调控肝脏微环境的机制。本项目将揭示iNKT细胞对肝脏免疫微环境的作用,为移植排斥的预防与治疗提供理论依据。

器官或组织移植是目前国内外临床治疗大多数器官或组织功能衰竭性疾病的有效手段，由于同种异体供、受者间存在组织抗原型差异，排斥反应成为临床上亟待解决的问题。诱导受者对供体器官特异性免疫耐受是解决移植排斥反应最理想的措施。因此，如何寻找新的有效的免疫特异性干预靶点成为国内外移植学科共同关注的问题。现阶段在我国乙肝肝炎相关性疾病（肝癌、肝衰竭等）是导致肝移植的最根本原因，而器官移植后的排斥产生除了以上提到的“供受者间存在组织抗原型差异”外，炎症活跃期是导致免疫系统激活有可能是产生排斥的另一大因素。固有免疫T细胞，如iNKT细胞，MAIT细胞及其他类型的CD161+T细胞在肝脏区域大量富集提示其在肝脏区域中发挥着重要的意义。 .本项目总结了在外周血中CD161+固有细胞群体（包括iNKT及MAIT细胞群体）在健康人及排斥人群中的表型及特点，同时提出了在外周血中及肝脏iNKT细胞及MAIT细胞在乙肝感染下的表型及特点进一步结合基因组及单细胞分析对CD161+固有免疫细胞群体在不同肝脏疾病中进行深入分析及探讨。.本研究主要结果包括：（1）iNKT细胞数量在排斥患者中有较大幅度下调且免疫抑制分子LAG3有较大幅度下调；（2）MAIT细胞数量有下调趋势且免疫抑制分子PD1有显著下调；（3）HBV环境条件性影响iNKT细胞数量上升但功能性缺失；（4）HBV环境下MAIT细胞显著减少，且产生 IFN-γ 的功能受损；（5）慢性HBV感染者外周循环与肝脏内MAIT细胞的免疫活性存在差异：外周血MAIT细胞的免疫活性标记(HLA-DR, CD69 和 CD38)高于比肝脏内 MAIT 细胞更高；.（6）TCR 库测序显示慢性HBV 感染者外周循环与肝脏内MAIT 细胞的克隆性和多样性存在差异。