iNKT细胞通过调控NK细胞促进酒精性脂肪肝发生的作用机制研究

The importance of innate immune cells and factors in alcoholic liver disease is remarkable. We have previously reported that Kupffer cell-derived NLRP3 inflammasome activation and IL-1β maturation-induced hepatic iNKT cell accumulation are critical in the pathophysiologic process of alcoholic steatohepatitis, however, how iNKT cells promote hepatosteatosis remains obscure. Recently, we further found that alcohol consumption suppressed the protective roles of NK cells against fatty liver, however, the number and functions of NK cells which were reduced in WT mice, were restored to normal levels in iNKT-deficient Jα18 KO mice undergoing chronic-binge ethanol feeding, indicating the inhibitory roles of iNKT cells toward NK cells. In the present project, we aim to investigate the molecular mechanism underlying how NK cells protect against alcoholic hepatosteatosis through NK cell-specific IFN-γ-deficient mice or NK cell-deficient mice，treatment with exogenous IFN-γ on NK cell-deficient mice and stimulation of hepatocytes with IFN-γ in vitro; In addition, we will study how iNKT cells exert their inhibitory roles toward NK cells by iNKT-deficient mice, iNKT cell relevant cytokines evaluation, cell-cell contact and adoptive cell transfer, and provide mechanistic insight into the interaction of NK cells and iNKT cells in alcoholic hepatosteatosis and revealing a promising target for ALD therapy.

天然免疫细胞及分子在酒精性肝病研究中的重要性日益彰显。我们之前的研究证明酒精可通过活化枯否细胞NLRP3炎症小体来大量分泌IL-1β，从而招募iNKT细胞并引起脂肪肝炎，但后者如何导致肝脏脂肪化尚未可知。最近的预实验发现，酒精可导致NK细胞抑制脂肪肝的作用下降，但在iNKT细胞缺陷鼠中其功能不受影响，提示酒精可通过iNKT细胞抑制NK细胞功能。本课题拟一方面通过NK细胞特异性IFN-γ缺陷鼠或NK细胞缺陷鼠、缺陷鼠体内补加IFN-γ及IFN-γ体外刺激肝细胞等实验，研究NK细胞抑制脂肪肝形成的分子机制，另一方面通过iNKT细胞缺陷鼠、相关细胞因子检测、细胞体外共孵育及细胞回输等实验，验证iNKT细胞对NK细胞的负调效应，同时观察NK细胞功能与酒精性脂肪肝形成，从而了解iNKT细胞-NK细胞相互作用促进酒精性脂肪肝的机制以及可能的干预途径。

天然免疫细胞及分子在酒精性肝病研究中的重要性日益彰显。我们和其他研究组之前发现饮酒可导致肝脏NK细胞功能抑制，同时导致iNKT细胞活化，提示我们在酒精性肝病中二者之间可能存在一定联系。在本研究中，我们发现在慢性酒精饲喂加一次大量灌胃的小鼠模型中，NK细胞和IFN-γ可以保护酒精诱导的肝脏脂肪化。通过对野生型小鼠进行 anti-ASGM1处理清除NK细胞，或者使用IFN-γ缺失的GKO鼠可以导致更为严重的酒精性脂肪肝。同时，IFN-γ在体外可以直接下调原代肝实质细胞中的脂质合成。相反，iNKT缺失的Jα18-/- or IL10-/-鼠呈现出减轻的酒精性脂肪肝，伴随着NK细胞数量和IFN-γ分泌的恢复，而外源性补充IL-10抑制NK细胞的数量和功能。此外，清除Jα18-/- or IL10-/-鼠中的NK细胞会导致更严重的脂肪肝，提示NK细胞是抑制肝脏脂肪化的直接效应细胞。更重要的是，过继转输来自野生型小鼠而非IL-10-/-小鼠的iNKT细胞可以抑制Jα18-/-鼠中NK细胞的数量和功能并加重酒精性肝损伤，提示产生IL-10的iNKT细胞（NKT10）是NK细胞的调节因子。结论：酒精活化的NKT10细胞可以拮抗NK细胞在酒精性脂肪肝中的保护作用。