筛选干预黑色素瘤伊马替尼（Imatinib）耐药相关microRNAs的小分子化合物

利用激酶抑制剂对肿瘤患者进行靶向性个体治疗是转化医学的重大进步。黑色素瘤发生率及死亡率呈逐年增加的趋势，但尚缺乏有效的疗法。伊马替尼（Imatinib）是一种特异性酪氨酸激酶抑制剂，在胃肠道肿瘤、白血病以及黑色素瘤的治疗中具有广阔的前景，但是在黑色素瘤治疗中出现的继发耐药现象成为了限制其继续发挥作用的障碍，也是目前国际黑色素瘤研究的热点。近来研究显示microRNA的突变和异常表达与肿瘤的发展、预后以及耐药性的形成密切相关，但是黑色素瘤耐药相关的microRNA研究在国内外基本还是空白。本研究拟从microRNA的角度探讨黑色素瘤患者伊马替尼继发耐药的机制，通过芯片筛选的方法比较伊马替尼敏感和耐药组间microRNA表达谱的改变，寻找介导耐药的microRNAs，利用细胞平台筛选可有效干预耐药组microRNAs异常表达的化合物，探讨逆转伊马替尼耐药的策略和方法。

伊马替尼用于晚期c-kit突变黑色素瘤患者的治疗初期具有较好疗效，但多数患者很快发生耐药反应。既往在胃肠道间质瘤中对伊马替尼继发耐药机制的研究发现基因突变、易位、缺失、扩增及表观遗传变异可能与伊马替尼继发耐药相关。但是黑色素瘤对伊马替尼耐药机制尚不清楚。本研究通过miRNA测序结合qPCR验证发现miR-18a表达水平在继发耐药的黑色素瘤组织中显著下调。细胞增殖及凋亡检测表明miR-18a过表达联合伊马替尼治疗可抑制细胞增殖及促进细胞凋亡；划痕实验表明miR-18a过表达及联合伊马替尼处理可抑制黑色素瘤细胞的迁移能力。利用荧光素酶报告分析、免疫印迹等方法验证伊马替尼耐药细胞中miR-18a及其靶标之间的关系，明确了CCND2，Notch2及IRF2为miR-18a的靶分子。通过拯救实验探讨了miR-18a，CCND2/Notch2/IRF2及黑色素瘤细胞伊马替尼耐药表型改变之间的关系，发现miR-18a介导的CCND2/Notch2/IRF2表达变化增加了伊马替尼耐药细胞系对伊马替尼治疗的敏感性。miR-18a-CCND2/Notch2/IRF2调控轴介导了黑色素瘤细胞系对伊马替尼继发耐药反应，恢复miR-18a的表达有望成为逆转黑色素瘤患者对伊马替尼继发性耐药的有效措施。. 在本项基金的资助下，获得如下成果：发表论著11篇，其中SCI收录论著6篇，累计影响因子50.932，在国内核心期刊发表论著5篇，相关研究论文结果为核心内容的项目获得2013年度北京市科学技术奖二等奖。培养博士研究生7人，硕士研究生8人。研究成果被2013年第十七届全国临床肿瘤学大会（CSCO）遴选为大会报告，并被2014年美国临床肿瘤学年会（ASCO）收录。