基于L-肉碱信号通路探讨灵归方对弱精子症大鼠精子活力的调控机制

Male infertility is a common disease, and asthenospermia is one of the main causes of male infertility. In the clinical practice，the research group found that Ling Gui Fang treatment asthenospermia safely and effectively, could improve sperm motility; latest researches find that L-carnitine is closely related to occurrence of asthenospermia. This study will investigate mechanism of Ling Gui Fang treatment asthenospermia from the L-carnitine normalized signal path. Researcher group will adopt recognized rat model at present, and etect seminal plasma in L - carnitine, rat sperm vitality, epididymal carnitine transporters and ultrastructural changes of epididymis by 12 weeks after intervention. Exploring possible mechanism of the Ling Gui Fang treatment asthenospermia to provide new theoretical support for further clinical applications.

男性不育症是临床常见病，弱精子症是导致男性不育症的主要原因之一。课题组在临床前期观察灵归方治疗弱精子症安全有效，能够提高精子活力；结合弱精子症发病机制的最新进展，认为L-肉碱与弱精子症的发生密切相关；本研究将从L-肉碱信号通道探讨灵归方治疗弱精子症的可能作用机制。课题组采用目前较公认的弱精子症大鼠模型，灵归方干预12周后，检测精浆中L-肉碱、大鼠的精子活力、附睾内肉碱转运蛋白及附睾超微结构变化。探讨灵归方治疗弱精子症的可能作用机制，为补肾活血法治疗弱精子症提供进一步的理论基础。

目的：探讨灵归方对奥硝唑（ORN）所致不育症大鼠精液质量的影响及其可能作用机制。方法：将40只雄性SD大鼠进行编号，根据所有大鼠体质量，随机将其分为空白组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组各10只。灵归方组：予灵归方浓缩液，按17.5g生药/kg体重+400mg/(kg.d)ORN；模型组：予400mg/(kg.d)ORN；左卡尼汀组：予左卡尼汀100mg/kg+400mg/(kg.d)ORN；正常组：予生理盐水。均 1 次/d，连续灌胃后 4 周检测各组大鼠精液质量、精浆中L-肉碱的含量，大鼠附睾OCTN2mRNA 的表达，及睾丸组织病理。结果：各组与模型组相比，精子浓度无统计学差异(P>0.05)；前向运动精子（PR）和前向+非前向运动（NP）精子百分率均上升，差异有统计学意义（P<0.01）；与空白组比较，灵归方组与左卡尼汀组PR+NP级精子百分率差异无统计学意义(P>0.05)。各组附睾的肉碱含量高于模型组相比，有统计学差异差异（P<0.01）；与空白组比较，左卡尼汀组与灵归方组肉碱含量无统计学差异(P>0.05)。与空白组组比较，模型组OTCN2 mRNA表达量无显著差异(P＞0.05)，灵归方组、左卡尼汀组 OTCN2 mRNA表达量明显高于模型组，有统计学差异(P<0.05)，与正常组之间比较无统计学差异(P<0.05)。睾丸病理观察结果发现，与空白组比较，模型组异常结构生精小管明显增多，排列不整齐，生精小管管腔缩小加重，管腔内精子及精子细胞数量减少，空腔型生精小管明显增多，生精小管内部各级生精细胞缺失，排列层次紊乱，上皮部分变性并出现空泡征;左卡尼汀组及灵归方组大鼠睾丸组织结构趋于正常，生精小管中各级生精细胞排列基本规整，生精小管结构基本正常。结论：1.奥硝哇可诱导大鼠产生弱精子症，且与L-肉碱含量密切相关。2.灵归方可以改善奥稍吐诱导的弱精子症。3.灵归方可以改善奥硝唑诱导睾丸的病理组织结构。3.灵归方可以提高附睾中OCTN2mRNA 在附睾中的表达，其可能与提高附睾肉碱浓度有关。