蜂毒素抗肝癌血管生成的作用靶点之一-组织蛋白酶S？

血管生成是肝癌生长和转移复发的一个重要因素，研究表明Cathepsin S（Cat S）在血管生成和转移中具有重要作用，而蜂毒素具有明显的抑制肝癌血管生成作用。但Cat S在肝癌新生血管形成中的作用机制以及蜂毒素抗血管生成和抑制HCC侵袭转移的作用靶点还不十分清楚。我们在前期研究中发现Cat S与肝癌的侵袭转移可能有关，因此，本项目拟通过观察Cat S对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、肝癌细胞和肝癌裸鼠模型生物学特性的影响，及蜂毒素对Cat S的作用，探讨Cat S在血管生成中的作用机制，并寻找新的抗肿瘤新生血管治疗靶点。

一、项目完成情况：.1.成功筛选出高表达Cat S基因MHCC97-H肝癌细胞系。通过RT-PCR和Western-blot方法筛选出（Cat S）基因高表达的MHCC97-H肝癌细胞株作为的实验研究对象。.2．通过RNA干扰（RNAi）技术成功沉默MHCC97-H细胞中的（Cat S）基因。构建三对（Cat S）siRNA基因，分别转染MHCC97-H细胞，通过RT-PCR和Western-blot实验方法对三个候选序列进行检测。本实验选用能显着抑制（Cat S）基因表达的siRNA-1011,并转染MHCC97-H细胞作进一步研究。.3．沉默Cat S基因能抑制MHCC97-H细胞增殖。MTT实验结果显示：siRNA-1011转染MHCC97-H细胞后增殖受到明显抑制。.4. 沉默Cat S基因诱导MHCC97-H细胞凋亡。Annexin V-FITC/PI结果显示：siRNA-1011转染MHCC97-H 48 h后明显诱导细胞的凋亡。.5. 沉默Cat S基因抑制MHCC97-H细胞的侵袭和迁移。Transwell小室和划痕实验结果显示：siRNA-1011转染MHCC97-H后通过Matrigel的侵袭能力和愈合能力显着下降。Western-blot结果显示：转染siRNA-1011明显抑制MHCC97-H细胞MMP-2蛋白的表达。.6．沉默Cat S基因抑制HCC相关的血管生成。ELISA实验测定细胞培养上清VEGF结果显示：转染siRNA-1011细胞能显着抑制VEGF的分泌水平，和人脐静脉细胞小管的形成。.7. 通过体内实验观察蜂毒素调控Cat S肝癌血管生成的作用。蜂毒素能明显抑制裸鼠肝癌原位移植模型肿瘤的生长。所有的实验均按照计划进行，没有对内容作大幅度的调整和变动。.二、项目取得的成果：.1..人才培养情况研究生培养情况：在读博士研究生2名；在读硕士研究生3名；已答辩硕士研究生1名.2..发表SCI论文1篇