穿山龙对支气管哮喘小鼠糖皮质激素受体活性的影响及其机制研究

Airway inflammation is the main pathological basis of bronchus asthma (asthma), and the epithelial cells take an important role in it. Glucocorticoids (GC) suppress inflammation with combining the glucocorticoid receptor (GR), but the long-term use of GC can lead to corticosteroid-dependent. Traditional Chinese medicine ChuanShanLong (Dioscorea nipponica Makino) is used in asthma effectively by us because of its antioxidation, anti-inflammatory effects. And it may have ability to compete with GC combining GR because its main ingredients have the similar molecular structure with GC. However, there is no study related mechanism of its treatment against asthma at home and abroad. This research has proved that Rhizoma Dioscorea nipponica Makino can decrease infiltration of inflammatory cells in airway mucosa and the submucosa of asthma guinea pigs, reduce their airway inflammation and strengthen the acetic acid prednisone curative effect. On the other hand, their combine medication can reduce the dosage of acetic acid prednisone and its side effects. Therefore, we speculate that Dioscorea nipponica Makino suppresses inflammation and affect by influence GR activity, and affect glucocorticoids resistance. This project will construct an asthma mouse model and culture airway epithelial cells, then research the influence of Dioscorea nipponica Makino on GR of bronchus asthma mice at tissue, cell and molecule levels, explore the potential anti-inflammatory effect mechanism, look for the target of Dioscorea nipponica Makino in order to supply asthma clinical treatments with new drug strategy.

气道炎症是哮喘的主要病理基础，气道上皮细胞在气道炎症发生过程中起着至关重要的作用。糖皮质激素（GC）通过结合糖皮质激素受体（GR）发挥强大抗炎作用，但长期使用易造成激素依赖。我们应用具有活血祛风、化痰平喘作用的中药穿山龙在临床上治疗哮喘，取得良效。现代药理认为穿山龙具有抗氧化、抗炎等作用，其主要成分结构与激素相似，故可能具有和GC竞争GR的能力，但目前国内外未见相关研究。本课题组已证明穿山龙可改善哮喘豚鼠气道粘膜及粘膜下层炎性细胞浸润，减轻气道炎症，并可增强激素疗效，联合应用可减少激素用量，减低其毒副作用。我们推测穿山龙可能通过影响GR活性起抗炎作用，并影响激素耐药性。本项目拟构建哮喘小鼠模型并培养其气道上皮细胞，介入穿山龙及其含药血清干预治疗，从组织、细胞及分子水平就穿山龙对哮喘小鼠GR活性的影响及作用机制进行研究，探索其潜在抗炎作用机理，寻找穿山龙治疗哮喘的作用靶点。

气道炎症是哮喘的主要病理基础，气道上皮细胞在气道炎症发生过程中起着至关重要的作用。糖皮质激素通过结合糖皮质激素受体发挥强大抗炎作用，但长期使用易造成激素依赖。应用具有活血祛风、化痰平喘作用的中药穿山龙在临床上治疗哮喘，取得良效。现代药理认为穿山龙具有抗氧化、抗炎等作用，其主要成分结构与激素相似，故可能具有和糖皮质激素竞争糖皮质激素受体的能力，但目前国内外未见相关研究。本课题组已证明穿山龙可改善哮喘豚鼠气道粘膜及粘膜下层炎性细胞侵润，减轻气道炎症，并可增强激素疗效，联合应用可减少激素用量，减低其毒副作用。故推测穿山龙可能通过影响糖皮质激素受体活性起抗炎作用，并影响激素耐药性。本项目拟构建哮喘小鼠模型并培养其气道上皮细胞，介入穿山龙及其含药血清干预治疗，从组织、细胞及分子水平就穿山龙对哮喘小鼠糖皮质激素受体活性的影响及作用机制进行研究，探索其潜在抗炎作用机理，寻找穿山龙治疗哮喘的作用靶点。 . 本研究主要采用体内实验观察穿山龙对支气管哮喘小鼠的抗炎作用及其机制研究。应用石蜡切片进行常规苏木精－伊红染色，观察气道壁厚度及平滑肌厚度；用ELISA法测定肺泡灌洗液IL-1，IL-6，TNF-α水平；用免疫组化检测GRα、GRβ及HSP90的表达；用Real-Time PCR检测GRα、GRβ、HSP90的mRNA表达差异；用Western blot检测GRα、GRβ、HSP90的蛋白表达水平。体外实验主要观察穿山龙对支气管哮喘小鼠气道上皮细胞的抗炎作用及其机制研究。主要用ELISA试剂盒检测IL-1、IL-6、TNF-α的含量；用Real-Time PCR检测GRα、GRβ、HSP90的mRNA表达差异；用Western blot检测GRα、GRβ、HSP90的蛋白表达。. 结果显示穿山龙对支气管哮喘有一定的抗炎作用。穿山龙治疗哮喘的抗炎作用与糖皮质激素的协同作用与糖皮质激素受体有关。穿山龙可以对抗因大量使用糖皮质激素所引起的糖皮质激素受体数量减少。穿山龙可通过影响糖皮质激素受体α的活性对哮喘发挥抗炎作用，通过影响糖皮质激素受体β的活性降低糖皮质激素耐药性。