糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子及其受体在支气管哮喘Tregs细胞免疫调节中的机制研究

In the immunology pathogenesis of asthma, the antigen presenting of dendritic cells (DCs) will affect T cell proliferation and differentiation and immune response, thus will directly determine the development of asthma. It is confirmed that regulatory T cells (Tregs) are inhibited in asthmatics, and enhancing the immunoregulatory function of Tregs can restore the immune imbalance, thus protect asthma. Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor (GITR/GITRL) is involved in many immune regulatory processes. Inhibition of GITR/GITRL coupling can reduce T-cell activation and proliferation, thus inhibit the immunoregulatory function of Tregs. Based on our previous experimental results, we believe that GITR/GITRL coupling may play an important role in the immunoregulatory of asthma. Therefore, in this study, DCs are selected as the target cells, and GITR/GITRL pathway is chose as a key point, and gene silence and transfection are used to regulate this pathway from multiple aspects to investigate the effect of GITR/GITRL pathway on the antigen presentation of DCs, Th subpopulation differentiation and regulation of Tregs function, which may protect from asthma and provide a new idea for the treatment of asthma.

在哮喘免疫学发病机制中，树突状细胞（DCs）抗原提呈状态及其对T细胞增殖分化和免疫应答的影响将直接决定哮喘的发生发展。研究证实哮喘患者存在调节性T细胞（Tregs）功能受抑制，增强Tregs免疫调节功能可恢复哮喘的免疫失衡，对哮喘起到保护作用。新近发现糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子及其受体（GITRL/GITR）参与了诸多免疫调控环节，抑制该通路可降低T细胞活化、增生，同时减弱Tregs的免疫调节功能。结合前期实验结果，我们认为该通路在哮喘免疫反应中起着重要作用。因此，本项目选择肺DCs为靶细胞，以GITRL/GITR通路为切入点，采用基因调控、转染等方法，从多环节调控该通路，初步探讨GITRL通路通过对DCs抗原提呈、Th亚群分化及调控Tregs功能的影响，进而起到哮喘保护作用，为哮喘的治疗提供新的思路。

在哮喘免疫学发病机制中，树突状细胞（DCs）抗原提呈状态及其对T细胞增殖分化和免疫应答的影响将直接决定哮喘的发生发展。研究证实哮喘患者存在调节性T细胞（Tregs）功能受抑制，增强Tregs免疫调节功能可恢复哮喘的免疫失衡，对哮喘起到保护作用。新近研究发现糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子及其受体（GITRL/GITR）参与了诸多免疫调控环节，抑制该通路可降低T细胞活化、增生，同时减弱Tregs的免疫调节功能。课题组成功建立小鼠HDM哮喘或GITRL哮喘敲低模型，通过行肺组织HE染色、血清IgE水平检测、肺功能检测和流式细胞术检测DC表面GITRL及Treg、Th1、Th2、Th17等细胞亚型，研究DCs上GITRL水平对Tregs的免疫调节作用及对哮喘的调节作用。研究发现哮喘小鼠肺组织GITRL表达较对照组增高，且Treg细胞比例下降，Th2和Th17细胞比例升高。用腺相关病毒敲低小鼠肺组织中GITRL后，哮喘小鼠肺部炎症及气道高反应性减轻，且Treg细胞比例增高，Th2和Th17细胞比例降低。体外培养原代骨髓来源DC细胞，HDM刺激后，DC表面分子GITRL表达增加；用慢病毒敲低DC上的GITRL，发现DC表面的GITRL具有调节CD4+T细胞分化的作用，诱导Treg细胞比例增高，Th2和Th17细胞比例降低。提示哮喘中GITRL表达增高，并在一定程度上促成了Th1/Th2和Th17/Treg细胞的失衡，敲低GITRL后，可部分恢复Th1/Th2和Th17/Treg细胞的平衡，从而对哮喘产生保护作用。进一步发现哮喘模型中，GITRL/GITR-MAPKs/NF-κB信号通路处于激活状态，而敲低肺组织GITRL后，GITRL/GITR-MAPKs/NF-κB信号通路受到抑制。课题组进而检测了哮喘儿童外周血中GITRLmRNA水平，发现哮喘患儿外周血中GITRLmRNA水平增加。综上所述，DCs表面GITRL可使调节性T细胞（Tregs）对于效应性T细胞的免疫抑制功能减弱。下调DCs表面GITRL可减少GITRL/GITR偶联，进而增强Tregs免疫调节功能，从而起到哮喘保护作用。因此下调GITRL可增强Tregs免疫抑制作用，为哮喘免疫平衡形成提供重要条件，可能成为潜在的调控Tregs功能的“开关”分子。为哮喘的免疫治疗提供了潜在的治疗方案，新靶标和思路。