糖皮质激素对其受体亲和力的调节及其分子机制

我们的工作假说是：糖皮质激素(GC)使其受体(GR)复合物解聚，使GR亲和力降低，而完全解聚的GR单体就是我们以前报告的低亲和力受体。为了验证此工作假说，本项目的研究内容包括：①GC处理肝癌细胞系SMMC-7721后，用放射配体结合法检测GR的Kd值，同时通过对免疫沉淀纯化的GR的蛋白电泳，确定其是否发生了解聚，以及解聚和GR亲和力的关系；②检测GR单体的Kd值及甾体特异性，是否与低亲和力GR的一样；③如电泳结果表明有未完全解聚的GR，通过质谱分析和RNA干扰技术对未解聚的GR伴侣蛋白作进一步的分离、鉴定，并确定其和GR亲和力的关系；④给大鼠注射GC，重复上述实验的①和③。本项目的意义是为GC调节GR的分子机制增加新内容，阐明低亲和力GR的分子基础，为临床大剂量激素治疗提供理论依据，并为将来制备只识别低亲和力GR的抗体打好基础。