MicroRNA对舌鳞癌侵袭转移的调控作用研究

本课题组前期已经筛选获得不同临床分期舌鳞癌的miRNA表达谱，并挑选了其中高表达的miR-21为对象，在细胞和动物模型中证实了miR-21对舌鳞癌增殖和凋亡的调控作用。鉴于局部侵袭、淋巴结和远处转移是舌癌疗效不佳和患者死亡的主要原因，为探讨miRNA对舌鳞癌侵袭转移的调控作用，本项目将从前期获得的表达谱中挑选数个显著差异的miRNA在临床N0和N1舌癌标本中再验证，获得侵袭转移相关的候选miRNA，再通过转导miRNA拟似物或其抑制分子，干预舌鳞癌细胞内的miRNA水平，在细胞摸型中观察对癌细胞侵袭、迁移能力的影响和对EMT的调控作用，并在动物体内观察肿瘤侵袭转移能力以及肿瘤血管淋巴管生成的改变，同时检测相关靶基因表达变化。通过本研究确定几个与舌鳞癌侵袭转移相关的miRNA，为阐明miRNA调控舌鳞癌侵袭转移机制提供新切入点，并为研制针对舌鳞癌侵袭转移特性的miRNA靶向药物提供实验依据。

本项目以临床上头颈恶性肿瘤化疗一线药物顺铂，诱导建立了舌鳞癌细胞株CAL27、SCC25的耐药细胞株CAL27-res、SCC25-res，采用miRNA芯片技术，初步分析了舌癌细胞与舌癌顺铂耐药细胞miRNA 表达谱的差异，并以qRT-PCR进行验证，发现耐药细胞中miR-200b和miR-15b表达下调最明显，而且细胞与细胞之间连接消失，呈现间质表型，E-cadherin表达下调，Vimentin，N-cadherin表达上调，侵袭迁移能力增加。而升高miR-200b或miR-15b表达，CAL27-res和SCC25-res细胞的间质特性被逆转，侵袭迁移能力降低，对顺铂敏感性增加；同时高表达miR-200b和miR-15b，作用更明显。敲低miR-200b或miR-15b，CAL27和SCC25向间质表型转化，侵袭迁移能力增加，对顺铂的抗性增加。miR-200b和miR-15b的靶基因BMI1在CAL27-res细胞中表达升高，高表达miR-200b或miR-15b，BMI1表达降低，荧光素酶活性也降低。CAL27-res移植瘤在小鼠体内发生肝肺转移，而CAL27移植瘤无转移，高表达miR-200b或miR-15b，显著抑制CAL27-res移植瘤的转移能力，而对移植瘤的生长无明显影响。与化疗敏感的舌鳞状细胞癌样本相比，化疗抗性的肿瘤样本中，miR-200b和miR-15b表达低，BMI1表达高；BMI1表达与miR-200b或miR-15b的表达负相关；miR-200b或miR-15b表达水平与病人发生淋巴结转移，对化疗的抗性负相关，而BMI1表达水平与病人发生淋巴结转移，对化疗的抗性正相关。Kaplan-Meier法和log-rank检验分析也表明，miR-200b或miR-15b表达水平高的病人总生存率高于表达低的病人，而BMI1表达水平低的病人总生存率高于表达高的病人。. 对照研究工作计划，我们已经完成预定的研究内容，并达到预期成果，在国内外重要刊物上发表了研究论文，SCI论文方面，《Oncogene》发表1篇，中文核心期刊发表2篇。人才培养方面，已培养博士研究生1名（孙丽娟），硕士研究生1名（林钊宇）。