lncRNA MALAT1通过SF2/ASF调控癌基因RON剪接促进膀胱癌演进的机制研究

研究表明长片段非编码RNA（lncRNAs）表达异常在肿瘤中起着促癌/抑癌的作用。我们前期研究表明lncRNA MALAT1在膀胱癌中过表达，而根据报道MALAT1在其他细胞过表达可导致RNA剪接蛋白SF2/ASF活性增加，产生癌基因RON的持续活化的异构体ΔRON，促进肿瘤的增殖和转移。我们进一步预实验证实膀胱癌组织中存在ΔRON表达。由此，我们提出：MALAT1通过促进SF2/ASF磷酸化调控癌基因RON剪接促进膀胱癌演进和转移。本研究拟通过调控MALAT1表达观察膀胱癌细胞增殖、浸润、上皮-间质转化和转移能力的改变，通过过表达/敲低技术，获得MALAT1通过SF2/ASF产生异构体ΔRON的可靠依据，为膀胱癌靶向治疗提供新的思路。分析MALAT1与膀胱癌临床病理指标的关系，确定MALAT1是否可作为判断膀胱癌恶性程度和预后独立指标，指导临床实践。

膀胱癌是我国泌尿男生殖系统最常见的恶性肿瘤，具有易复发、进展、转移特点。膀胱癌发病机制未明，可能与癌基因的激活及抑癌基因的失活，导致细胞生长失控有关。长片段非编码RNA lncRNA（long non-coding RNA,>200bp）是非编码RNA的一种，它可以在多种层面上调控基因的表达。有关lncRNA在肿瘤中的作用及其功能研究刚处于起步阶段，有研究表明lncRNA在一些肿瘤中异常表达，并通过对下游靶基因调控，在肿瘤发生、发展、转移中行使着重要的癌基因或抑癌基因的功能。lncRNA 在膀胱癌中的表达及作用尚未阐明。在我们的研究中，我们通过RT-qPCR发现lncRNA-MALAT1在膀胱癌组织中高表达，进一步我们使用原位杂交及荧光原位杂交技术检测了100例膀胱癌及其癌旁组织的MALAT1的表达，发现其中79例MALAT1在癌组织中高表达，其表达水平与淋巴结转移相关。进一步分析 MALAT1 与膀胱癌临床指标的关系，我们发现MALAT1高表达与膀胱癌患者淋巴结转移和预后不良相关，可作为判断膀胱癌预后的指标。通过细胞功能研究发现，敲低MALAT1能够抑制膀胱癌的增殖、克隆形成和迁移、侵袭能力，通过western blot发现敲低MALAT1导致上皮型细胞分子标记E-Cadherin表达升高，间质型细胞分子标记Vimentin和Fibronectin表达降低，抑制膀胱癌细胞的上皮-间质转化。进一步证实MALAT1 敲低可导致 RNA 剪接蛋白 SF2/ASF 活性增加，但ΔRON的表达水平并未发现明显改变。进一步的基因芯片分析发现，敲低MALAT1表达导致肿瘤侵袭趋化相关的MMP9、CCL20，与肿瘤细胞增殖相关ERBB3、ERBB4，发挥癌基因作用的长非编码RNA H19等表达均明显下降，而发挥抑癌基因作用的长非编码RNA MEG3等则表达明显上升。ELISA证实，MALAT1敲低导致膀胱癌细胞分泌MMP9明显减少。体内动物实验也证实，MALAT1敲低导致膀胱癌细胞皮下成瘤能力和远处转移能力减弱。我们的研究结果为膀胱癌治疗提供新的思路和理论依据，具有重要的理论及临床意义。