针刺人中穴对脑缺血再灌注大鼠钙激活钾通道调控机制的研究

脑血管病，以其发病率、死亡率、致残率和复发率高而严重危害着人类健康，为中老年人易患的三大疾病之一。研究发现短暂性前脑缺血后大鼠海马CA1区锥体细胞膜钙激活钾通道(BKca)的活动性增强，外向K+电流的增加可以降低神经元兴奋性，触发细胞凋亡。针刺人中穴可以提高神经元的兴奋性，抑制细胞凋亡，发挥脑保护作用，但其对BKca离子通道的调控作用以及针刺抑制细胞凋亡发生的离子通道机制尚不明确。本实验以不同频率提插手法针刺人中穴干预局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO/R）。在酶急性分离成年大鼠海马神经元的基础上采用单通道膜片钳技术,记录海马CA1区BKca通道动力学特性的改变并检测凋亡相关因子的表达，从离子通道特性方面考察针刺人中穴干预脑缺血的作用机制,为针刺治疗脑缺血性损伤提供科学依据。

缺血性脑卒中，以其高发病率、高死亡率、高致残率和高复发率而严重危害着人类健康，为中老年人易患的三大疾病之一。研究发现脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区锥体细胞膜钙激活钾(BKCa)通道的活动性增强，外向钾离子电流的增加可以降低神经元兴奋性，触发细胞凋亡。针刺人中穴可以提高神经元的兴奋性，抑制细胞凋亡，发挥脑保护作用，但其对BKCa通道的调控作用以及针刺抑制细胞凋亡发生的离子通道机制尚不明确。.本研究从BKCa通道特性方面考察针刺人中穴的脑保护作用，以针刺机械手模拟人工提插手法针刺人中穴干预大脑中动脉缺血再灌注（MCAo/R）模型，对针刺频率分别从1次/秒、2次/秒、3次/秒三个参数水平进行考察。在酶急性分离成年大鼠海马神经元的基础上采用单通道膜片钳技术，考察脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区神经元细胞膜BKCa电流的改变以及针刺人中穴对BKCa通道的调节作用,并检测凋亡相关因子的表达，从离子通道动力学角度探讨针刺人中穴抑制大脑中动脉缺血再灌注后神经元调亡发生的作用机制，为临床针刺人中穴治疗脑梗塞提供更为丰富的实验依据。.通过本次研究，我们成功获得适合膜片钳记录的MCAo/R大鼠海马CA1区椎体神经元并观测到脑缺血再灌注后神经元细胞膜BKCa通道活动性的特征性改变，此项技术的建立使得应用膜片钳技术考察成年大鼠神经细胞电生理特性成为可能。并且发现不同刺激频率针刺人中穴对MCAo/R大鼠神经功能评分的改善可能与海马CA1区BKCa电流的特征性改变相关，不同针刺频率人中穴可能通过调节海马CA1区BKCa通道的开放特性，进而抑制MCAo/R大鼠NF-κb p65和Caspase-3的表达，间接降低细胞凋亡，从而促进神经功能的恢复。而在三个不同频率针刺人中穴改善MCAo/R大鼠的神经功能和神经元的凋亡上，针刺3次/秒组明显优于针刺2次/秒组，并且非常明显优于针刺1次/秒组，间接证明了针刺存在量效关系，针刺的提插频率越高这个作用也越强，可作为临床针刺人中穴治疗脑梗塞的参考。