自身免疫调节因子（AIRE）经ICOSL调控TFH/TFR分化维持外周耐受的作用及机制

AIRE expressing in mTEC maintain central tolerance. In addition, AIRE also express in peripheral dendritic cells. However it is not clear about its role in peripheral tolerance. ICOSL expressing on dendritic cells (DC) mediated the differentiation of TFH, which help the activation of autoreactive B cell and lead to autoimmune disease. TFR can suppress the function of TFH. It was reported that TFH increased in AIRE deficient mice. And we also found the increased expression of ICOSL on DC in AIRE deficient mice. So we suppose that AIRE expressing in DC may affect the differentiation of TFH/TFR via ICOSL, which mediate the peripheral tolerance. Here we will use the T1DM as disease model to study the following parts: 1. Using the animal model to observe the relationship between AIRE with ICOSL and TFH/TFR. 2. Using the cell model to determine if AIRE is the key factor to affect the ICOSL expression. 3. Using gene expression regulation techniques to investigate the molecular mechanisms of AIRE regulating ICOSL expression. 4. Using T1DM model for integrated analysis of the role of AIRE regulating the differentiation of TFH/TFR via ICOSL and its role in T1DM. This study will provide experimental evidence to clarify the mechanisms of AIRE in peripheral tolerance, and treat multiple diseases by modulating TFH/TFR via targeting AIRE.

AIRE除表达于mTEC细胞维持中枢耐受外，还表达于外周DC细胞，但其在外周耐受中作用尚不明确。DC通过ICOSL介导TFH细胞分化，辅助自身反应B细胞活化，导致自身免疫病，TFR细胞可抑制TFH。研究报道AIRE缺陷鼠TFH增多，且我们发现AIRE缺陷鼠DC中ICOSL表达升高，因此推测DC中AIRE可能通过ICOSL影响TFH/TFR分化，维持外周耐受。本课题拟进行如下研究：1.利用动物模型观察AIRE与ICOSL表达及TFH/TFR细胞分化的关系；2.利用细胞模型确定AIRE是影响ICOSL表达的关键因素；3.利用基因表达调控技术探讨AIRE调控ICOSL表达的分子机制。4.利用T1DM模型综合分析AIRE通过调控ICOSL表达影响TFH/TFR细胞分化及在T1DM发病中的作用。为阐明AIRE在外周耐受中作用机制，并为以AIRE为靶点调控TFH/TFR分化治疗疾病提供实验依据。

本研究主要通过研究AIRE表达与TFH/TFR细胞之间的关系，以及与TFH分化相关的分子ICOSL表达之间的关系，确定了AIRE对TFH分化和ICOSL表达具有相关性；进一步通过体外研究证实表达AIRE的DC细胞可通过调控ICOSL、IL-6和IL-27表达抑制TFH细胞分化；探讨了AIRE调控DC细胞上相关分子表达的机制；进而在T1DM小鼠模型体内证实了AIRE对TFH的表达调控作用与机制，以及其在T1DM发病中的作用。.（1）利用动物模型观察AIRE与ICOSL表达及TFH/TFR细胞分化的关系. 利用AIRE敲除鼠建立OVA免疫小鼠及H1N1感染小鼠模型，证实AIRE缺陷时，TFH细胞数量增多，但TFR数量不变，且小鼠脾脏DC细胞上ICOSL表达升高。.（2）利用细胞模型观察AIRE对TFH分化的影响及机制. 通过建立AIRE敲除鼠骨髓DC细胞、过表达AIRE的DC2.4细胞以及过表达AIRE的骨髓DC细胞模型，体外研究证实了表达AIRE的DC细胞可通过调控ICOSL、IL-6及IL-27影响TFH细胞的分化。.（3）探讨AIRE对TFH分化相关分子表达调控的分子机制..利用上述几种细胞模型，进一步研究证实AIRE可能是通过调控DC细胞中NF-κB经典途径中IκBα和p65等分子发挥对ICOSL的表达调控作用。.（4）利用T1DM模型综合分析AIRE通过调控ICOSL表达影响TFH细胞分化及在T1DM发病中的作用. 采用T1DM小鼠模型（NOD鼠）为研究对象，通过体内研究证实表达AIRE的DC细胞可影响TFH细胞的分化及GC B细胞的产生，从而发挥外周免疫耐受的作用，发挥对T1DM的预防及治疗作用。. 研究为了解AIRE在外周免疫耐受中的作用，进而为了解AIRE缺陷导致自身免疫病中，自身反应B细胞及抗体产生的可能机制。