自身免疫调节因子（AIRE）对巨噬细胞活化类型的影响及其调控机制的研究

Role of autoimmune regulator （AIRE）expression in medullary thymic epithelial cells was revealed, however, its role in peripheral hematopoietic cells, especially monocytes/macrophages, DCs, remain poorly unknown. Our previous experiment has shown AIRE may have an effect on inducing macrophage into different phenotype, but we need more data to prove that...For better understanding the role of AIRE in macrophage, this project focuses on whether AIRE can influence phenotype of macrophage and what is the mechanism, can AIRE has an effect on regulating NF-KB targeting gene by CBP and then influence macrophage phenotype...To clarify these questions we will show credible evidence about the expression of AIRE in periphery myeloid cells and provide new possible theory for autoimmunal disease.

自身免疫调节因子（AIRE）在胸腺髓质上皮中表达的作用已经被证实，但在外周血源性细胞（如单核/巨噬细胞，DC细胞）中表达作用目前还不清楚。我们前期初步研究发现AIRE很可能对巨噬细胞活化类型产生影响，但是否如此，需要进一步研究证实。. 因此，为了深入了解AIRE在巨噬细胞中的具体作用，本课题主要围绕AIRE对巨噬细胞活化类型的影响及其调控机制，拟从以下几个方面进行探讨：（1）AIRE是否对巨噬细胞的活化类型产生影响？（2）AIRE影响巨噬细胞活化类型的具体机制是什么？是否通过影响CBP参与NF-κB对靶基因表达调控，进而对巨噬细胞的活化类型产生影响？. 对上述问题的阐明必将为我们深入理解AIRE在外周血源性细胞中表达的作用提供可靠的理论依据，并为应用AIRE基因治疗自身免疫病提供新思路。

自身免疫性多腺体综合症 I(autoimmune polyglandular syndrome type Ⅰ, APSⅠ)，又称 APECED（Autoimmune Polyendocrinopathy Candidiasis Ectodermal Dystrophy Phenotype），是一种以AIRE单基因突变导致的罕见的常染色体显性自身免疫性疾病，病人表现为：甲状旁腺功能减退、Addison’s病、白色念珠菌感染为特征的免疫缺陷症状。AIRE在胸腺髓质上皮细胞中能够通过上调外周组织中TSA的表达，维持阴性选择，清除自身反应性T细胞，从而在中枢耐受机制中发挥着重要作用。在外周免疫器官的二级淋巴结、脾脏和外周血细胞中AIRE主要表达细胞是淋巴结及脾脏基质细胞，DC细胞，单核/巨噬细胞。目前APECED病人对白色念珠菌易感的原因并不是很清楚。巨噬细胞对感染或损伤发生迅速的反应，活化后的巨噬细胞分化为两个不同的亚群：M1和M2，M2可进一步分为三个亚型：M2a、M2b、M2c。表达在单核/巨噬细胞上AIRE是否对巨噬细胞的分型产生作用呢？为了证实这个问题，我们分别用不同刺激物作用稳定过表达AIRE的RAW264.7细胞，使其分别向不同巨噬细胞极化，然后检测不同巨噬细胞亚型相关特异性分子IL-1、NO、Arg1、IL-10、GAS6的mRNA及蛋白表达水平变化情况。结果我们发现，AIRE可促进巨噬细胞系RAW264.7向M1型极化，上调炎性因子IL-1α、NO mRNA和蛋白的表达水平；抑制其向M2型极化，下调抗炎因子Arg1、IL-10、GAS6mRNA和蛋白的表达水平。同时，我们也发现AIRE的表达水平的变化与巨噬细胞极化有着密切联系，当巨噬细胞向M1型极化时，AIRE的mRNA的表达水平上调；当巨噬细胞向M2型极化时，AIRE的mRNA的表达水平下调。这些数据提示，AIRE可能促进巨噬细胞向M1型极化，增强机体对病原微生物的杀伤能力，从而为APECED (APS-I)病人对白色念珠菌的易感的原因提供一种可能的解释。此外，通过对APS-1患者Aire基因测序和分析，我们发现了导致APS-I的一个新的Aire基因突变位点，该突变点位于2号外显子核苷酸c.206A>C，该位点的突变导致AIRE氨基酸序列Q69P发生改变，这将为今后APS-1患者的早期诊断提供帮助。