长链非编码RNA uc002bbp.2在 NSCLC顺铂耐药中的机制研究

Long non-coding RNA plays a major role in non-small cell lung cancer (NSCLC) cisplatin resistance. Our previous study revealed that lncRNA uc002bbp.2 expression in NSCLC cisplatin-resistant cells was significantly higher than that of the parent cell by lncRNA high-throughput sequencing technology. Blocking lncRNA uc002bbp.2 could enhance sensitivity to cisplatin, and increase the expression of PTEN significantly. Our previous studies have demonstrated PTEN played an important role in NSCLC drug-resistant. Whereas lncRNA could bind PRC2 complexe to regulate histone H3K27 sites methylation of target gene, in turn coordinate to DNA methylation to silence the target gene. Interference the core subunit of PRC2 complexe (EZH2) could significantly increase PTEN expression and promote sensitivity to cisplatin. Therefore, we speculated that lncRNA uc002bbp.2 could silence PTEN expression by regulating promoter methylation to enhance cisplatin resistance of NSCLC. We intend to expand the clinical specimen validation to detect the correlation between lncRNA uc002bbp.2 and PTEN in NSCLC cisplatin resistance. We will explore the effects and molecular mechanisms involved in the regulation of PTEN expression by lncRNA uc002bbp.2 via in vivo and in vitro experiments, providing new basis and targets for reversing NSCLC cisplatin resistance.

长链非编码RNA在非小细胞肺癌（NSCLC）顺铂耐药中起着重要的作用。课题组利用lncRNA高通量测序发现，lncRNA uc002bbp.2在NSCLC顺铂耐药细胞中的表达显著高于亲本细胞。封闭其表达后细胞对顺铂敏感性增加，PTEN的表达明显上调。前期研究表明PTEN与NSCLC耐药密切相关，而lncRNA可通过绑定PRC2复合物调控靶基因组蛋白H3K27位点甲基化沉默靶基因。课题组干扰PRC2核心亚基EZH2后，PTEN表达明显增加，细胞对顺铂敏感性增加。故此提出假设lncRNA uc002bbp.2可通过调控 PTEN启动子区甲基化沉默其表达，增加NSCLC顺铂耐药性。本项目拟在临床标本中检测lncRNA uc002bbp.2及PTEN与NSCLC耐药的相关性，并利用体内外实验进一步明确其调控PTEN在NSCLC中的作用及分子机制，为逆转临床NSCLC顺铂耐药提供新的理论依据及靶点。

目前，以铂类为基础的两药联合化疗方案仍是靶向驱动基因阴性的IIIb/IV期非小细胞肺癌患者的首选策略。而化疗后耐药常限制了患者的生存。本项目前期对非小细胞肺癌铂类耐药机制的研究揭示，微小RNA、长链非编码RNA在其中起着重要的调节作用。本项目在前期研究基础上探索了一个新的长链非编码RNA在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用及机制。. 本项目首先通过lncRNA高通量测序筛选及细胞内验证，提出lncRNA uc002bbp.2在非小细胞肺癌顺铂耐药细胞中的表达显著高于敏感细胞，在组织样本中的表达与患者对顺铂的敏感性负相关。本项目拟通过体内外实验，明确lncRNA uc002bbp.2调控下游基因在NSCLC细胞顺铂耐药中的作用及分子机制。通过构建lncRNA uc002bbp.2的过表达质粒并转染入非小细胞肺癌敏感细胞A549，结果提示lncRNA uc002bbp.2高表达能够降低敏感细胞对顺铂的敏感性。将lncRNA uc002bbp.2的干扰治疗转染入非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP，能够提高耐药细胞对顺铂的敏感性。. 本项目应用MTT、克隆形成实验、流式测细胞增殖、流式测细胞凋亡、Western blot、qRT-PCR等方法研究在不同顺铂浓度下lncRNA uc002bbp.2的表达水平与细胞增殖、凋亡、迁徙、侵袭的关系。结果提示lncRNA uc002bbp.2可能通过调节PTEN等相关基因增加了NSCLC细胞顺铂耐药性，前期研究中MTT实验结果无重复性，克隆形成实验、流式细胞术结果为阴性，提示lncRNA uc002bbp.2不影响细胞增殖及凋亡。但在对上皮间质转化相关蛋白及基因分析中发现，lncRNA uc002bbp.2调节多种侵袭因子表达。. 综述所述，本项目在前期研究基础上表明lncRNA uc002bbp.2影响非小细胞肺癌对顺铂的耐药性与上皮间质转化过程相关。但其相关下游基因调控的研究还需更深入机制研究。