复层灌注微生物反应器结合hBMSCs/黑质DA能神经元3D共培养构建功能性多巴胺能神经网络的研究

建立稳定表达DA能神经元发育过程中关键调控基因的hBMSCs模型；首次发展出以促进hBMSCs扩增及神经向定向分化为目标的复层灌注微生物反应器，以液体灌注方式模拟移植体系内动态变化局部微环境，实现转染关键调控基因hBMSCs与人黑质DA能神经元三维共培养,在体外构建hBMSCs来源的DA能神经样细胞/黑质DA神经元局部神经网络模型。体外动态研究BMSCs来源DA能神经样细胞在与宿主神经元组成的神经网络中DA递质的释放、细胞神经电活动、突触结构形成，及与黑质DA神经元间突触信号传递。为BMSCs高效分化为功能性DA神经元提供关键证据；为临床应用BMSCs治疗帕金森病提供实验依据；为今后指导和干预BMSCs移植治疗帕金森病提供思路和可行技术支撑，真正解决临床BMSCs移植治疗PD的瓶颈问题。

建立稳定表达DA能神经元发育过程中关键调控基因的ADSCs模型；发展出以促进hBMSCs扩增及神经向定向分化为目标的复层灌注微生物反应器，创新性地完成新型复层灌注微生物反应器模具设计、铸型及三维细胞培养系统建立；同步针对神经系统特征，成功研制出器官组织特异性定植及定向分化支架技术及设备，形成独立知识产权技术。以液体灌注方式模拟移植体系内动态变化局部微环境，结合平行筛选系统，实现转染关键调控基因hADSCs与黑质DA能神经元三维共培养,在体外成功构建了神经元局部神经网络模型，筛选出促神经分化中药活性成分。动态研究神经网络中细胞神经电活动、突触结构形成，及突触信号传递。为ADSCs高效分化为功能性神经元提供了关键证据，并提出靶向干预策略，为下一步临床应用奠定坚实基础。