树突状细胞中KLF10在特发性血小板减少性紫癜免疫耐受中的作用及机制研究

特发性血小板减少性紫癜(ITP) 是一种以血小板过度破坏为特征的自身免疫性疾病，近年来研究表明树突状细胞(DC)的功能异常与ITP发病关系密切。我们的前期实验证实，在诱导ITP血小板特异性T细胞免疫耐受的过程中必须依赖于DC的存在。我们利用表达谱芯片技术进一步发现在诱导免疫耐受过程中DC的转录调节蛋白KLF10 (Kruppel-like transcriptional factor 10) 在所有的生物学重复和技术性重复实验中表达均显著上调，并应用实时定量RT-PCR和Western blotting验证了这一结果，提示KLF10在诱导免疫耐受中发挥重要作用。本课题拟在前期研究基础上以ITP为原型，在体外和体内实验中通过沉默或上调KLF10表达进一步研究对DC产生抗原特异性耐受的影响及其机制，阐明 KLF10在诱导DC产生免疫耐受中的作用，为研究ITP的靶向性治疗开辟新路径。

原发免疫性血小板减少症 (ITP) 是一种以血小板过度破坏为特征的自身免疫性疾病，近年来研究表明树突状细胞(DC)的功能异常与ITP发病关系密切。我们在前期研究中证实，在诱导免疫耐受过程中DC的转录调节蛋白KLF10 (Kruppel-like transcriptional factor 10) 在所有的生物学重复和技术性重复实验中表达均显著上调，提示KLF10在诱导免疫耐受中发挥重要作用。本项目拟在前期研究基础上以ITP为原型，在体外和体内实验中通过沉默或上调KLF10表达进一步研究对DC产生抗原特异性耐受的影响及其机制。.（1）在本项目中，我们首先诱导了ITP患者和正常对照DC，观察到ITP患者mDC中KLF10，Smad2，Smad4，Smad7，TGFb-R1，TGFb-R2的表达量均较正常人减少，TGFb的表达量无明显差异。.（2）我们诱导ITP患者CD4+CD25- T细胞分化为CD4+CD25+Foxp3+ iTreg，观察到与iTreg作用后，ITP患者mDC中KLF10、Smad2、Smad4、TGFb1、TGFb-R1和TGFb-R2表达升高，Smad7表达下降。应用KLF10特异性siRNA（sc-45463-V）转染DC后，DC中Smad2、Smad4、TGFb1和TGFb-R2表达下降，Smad7表达升高，TGFb-R1无明显变化。KLF10干扰病毒转染DC后，混合淋巴细胞反应试验显示DC刺激淋巴细胞增殖的能力明显增强。.（3）我们建立了ITP小鼠模型，构建了小鼠KLF10过表达慢病毒载体，经尾静脉注射法转染ITP小鼠，注射KLF10表达载体注射前及注射1周后留取ITP小鼠血液标本，研究结果表明：KLF10表达载体注射后KLF10、TGF-β1、Smad2和Smad4表达升高，Smad7表达下降。KLF10表达载体注射后明显增加了相对血小板计数，而各对照组中没有发现明显的变化。与对照组相比，血小板相关抗体（PAIgG）水平在ITP小鼠中显着增加，KLF10表达载体注射后ITP小鼠明显降低了PAIgG水平，而各对照组中没有发现PAIgG水平的明显差异。