吞噬凋亡细胞的树突状细胞亚群在诱导免疫耐受中的作用

以前期预实验获得的骨髓来源的树突状细胞（DC）吞噬凋亡小体能诱导形成调节性DC（DCreg）,进而通过活化STAT3信号通路分泌NO对抗原特异性CD4+T细胞具有抑制作用等结果为线索；拟采用不同DC亚群/凋亡细胞相互作用的研究模型，深入研究CD8α+DC亚群和CD8α-DC亚群吞噬凋亡细胞的关键识别受体，分析不同DC亚群诱导分化为DCreg的分子调控机制，探讨CD8α+DC亚群是否通过诱导调节性T细胞（Treg）、CD8α-DC亚群是否直接通过分泌NO建立针对凋亡细胞的免疫耐受，明确回输凋亡细胞治疗狼疮肾炎模型中关键的DC亚群及关键的识别受体。本项目旨在阐明不同DC亚群在吞噬凋亡细胞诱导免疫耐受中的关键识别受体及相应作用机制，有助于深刻理解不同DC亚群在免疫耐受、清除自身凋亡细胞维持免疫自稳中的作用，为自身免疫性疾病的治疗提供了理论基础。

机体的免疫系统是一个精密的反应体系，通过精确调控免疫应答的触发、进展和平息来维持体内环境的平衡和稳定。在多细胞生物的发育过程中，细胞的程序性死亡是不可避免的。因此，及时清除凋亡衰老的细胞对维持机体正常的免疫应答和免疫稳态至关重要。免疫应答的主体是免疫细胞，而树突状细胞(DC) 作为专职抗原提呈细胞是免疫应答的中心环节，在诱导免疫耐受和激发免疫反应的过程中均扮演着重要的角色。. 本研究发现将活化后凋亡的淋巴细胞与DC共培养能够诱导出吞噬早期凋亡细胞的树突状细胞(DCapo)，其CD11c、MHC II类分子和共刺激分子的表达明显下降，CD11b的表达上升，吞噬功能增强，而且能够显著抑制抗原特异性T细胞的增殖和分裂，符合调节性树突状细胞（DCreg）的特点；DCreg主要通过分泌NO来抑制抗原特异性T细胞的增殖，但未能发现DCreg诱导调节性T细胞（Treg）的产生或Treg参与DCreg的抑制作用。研究发现凋亡细胞诱导DCreg的分子机制与STAT3信号转导途径的活化相关，并且STAT3的活化导致iNOS的转录增强，使的NO的分泌增加，NO直接参与了DCreg的免疫抑制机制。研究的结果提示DC在活化后凋亡细胞所诱导免疫耐受中发挥的重要作用，从而有助于阐明体内活化后凋亡细胞诱导免疫耐受的发生机制。. 然而，若机体不能及时彻底地清理体内凋亡细胞，则大量凋亡细胞聚集并发展成为晚期凋亡或坏死细胞而诱导异常免疫反应，导致炎症或自身免疫病的发生。因此，通过回输大量的死细胞模拟体内凋亡细胞清除失败的微环境，研究体内DC、巨噬细胞等抗原提呈细胞在死细胞相关抗原所诱导的异常免疫反应中的作用。结果发现脾脏巨噬细胞和中性粒细胞是吞噬死细胞抗原的主要吞噬细胞；巨噬细胞和DC对死细胞相关抗原诱导充分的CD4+T细胞免疫反应均发挥重要作用。尽管巨噬细胞自身的抗原提呈能力较差，但它们能将所吞噬的抗原传递给DC从而增强T细胞对死细胞相关抗原诱导的免疫反应。重要的是，巨噬细胞可部分通过神经酰胺依赖途径分泌exosomes小体，而这种胞外分泌囊泡可作为“信息传递者”在巨噬细胞和DC之间传递抗原。提示在巨噬细胞和DC之间出现一条新的“信息交流途径”exosome小体，这将有助于阐明当机体内产生大量凋亡细胞未能被及时清理而发展成为晚期凋亡或坏死细胞，从而诱发自身免疫病的发生机制。