基于Treg/Th17平衡调节研究复方红豆杉胶囊治疗多原发肺腺癌的药效及作用机理

The morbidity of multiple primary lung adenocarcinoma (MPLA) is increasing year by year in China. The main lesions are removed by surgery, but the residual lesions were not sensitive to chemotherapy. Currently, there is no effective drug for MPLA treatment. The compound taxus chinensis capsule (CTC) is based on the theory of Fuzhengquxiehas and shows better curative effect on MPLA with more TILs including Treg and Th17. In inducible mouse primary lung adenocarcinoma model, CTC can significantly reduce the number of lung nodules and tumor invasion Treg, and change the phenotype of Th17 to promote anti-tumor immune. The project plans to collect more clinical samples to confirm the effectiveness of CTC on the treatment of MPLA. The synergistic effect of paclitaxel and ginsenoside Compoud K will be studied at cellular level. Animal models will be used to explore the efficacy and comparative characteristics of CTC compared with paclitaxel. The subject aims to elucidate the synergistic mechanism and immuno-regulation mechanism of CTC in the process of MPLA treatment, confirm the guiding significance of Treg/Th17 balance for CTC clinical application, and provide new ideas for the research of MPLA drug therapy.

多原发肺腺癌（MPLA）发病逐年增多，手术为主要治疗手段，切除主要病灶后残留病灶缺乏有效药物治疗。前期临床试验表明，基于中医扶正理论的复方红豆杉胶囊（CTC）对早期MPLA显示较好疗效。并且，在对免疫正常/缺陷小鼠的原发肺腺癌模型的药效研究中，发现CTC疗效与T细胞免疫相关。文献报道Treg/Th17调节在肿瘤免疫中发挥关键作用，前期研究发现，CTC对肿瘤组织中高表达Treg/Th17的MPLA患者疗效显著，同时明显减少小鼠原发肺腺癌组织中Treg数量，诱导Th17转化为抗肿瘤表型。体外筛选发现，人参皂苷体内代谢物CK是CTC中与紫杉醇协同发挥Treg/Th17免疫调节作用的单体化合物。因此，本项目将从细胞水平研究紫杉醇联合CK对Treg/Th17平衡的调节机制，并通过体内外实验阐明CTC治疗MPLA的作用机理，同时扩大临床样本规模验证CTC的疗效，为MPLA的治疗和药物研发提供新思路。

近年来，多原发肺癌（MPLA）检出率显著升高，其治疗手段以手术为主。前期的一组小样本临床试验发现，患者在接受复方红豆杉胶囊（CTC）口服治疗后，肿瘤总缓解率达到52.6%。基于此结果，课题组进一步扩大临床样本数目，对收集的肺癌患者进行回顾性分析，并探究了MPM患者的发病机理及转移机制。结果表明，TNF-α通过激活人淋巴内皮细胞HLEC中的NF-κB信号通路进而促进HLEC分泌CCL21。HLEC和CCR7高表达的肺癌A549细胞共培养发现，A549的淋巴管转移能力明显增强。同时通过siRNA敲减CCR7和CCL21中和抗体证明A549细胞在共培养体系中的转移能力增强是CCL21和CCR7依赖性的。另外，本研究也证明了肺癌的临床病理分期、肿瘤发生的时序性、肺癌手术方式的选择、其他器官肿瘤的治疗状态以及EGFR基因突变状态是影响患者预后的重要因素。前期研究已发现CTC的主要成分紫杉醇（PTX）和人参皂苷（CK）联用组在C57BL/6小鼠模型上有更佳的抗肿瘤药效，我们推测这种药效可能与T细胞免疫相关，因此构建了Lewis肺癌移植瘤模型，检测Treg/Th17相关指标（Foxp3、IL-17）及杀伤因子IFN-γ，发现联用组对小鼠瘤体积和瘤重的抑制效果最好，且能增加IL-17/Foxp3比值和IFN-γ表达，进而说明PTX联用CK可能通过影响Treg/Th17平衡，增加IFN-γ的分泌来发挥对肿瘤细胞的杀伤作用。而在体外采用C57BL/6小鼠脾脏来源细胞与小鼠肺癌Lewis细胞（LLC）共培养也得出相似的结论，即PTX联合CK能影响脾脏来源细胞Treg/Th17比例，并增加CD8+细胞的比例，ELISA结果也显示二者联用体外能增加IFN-γ的释放，提高对LLC的杀伤作用。以上研究结果表明，CTC作为肺癌辅助治疗药物，其诱导的抗肿瘤免疫在肺癌治疗中有着重要意义，为肺癌治疗开阔了新思路。