降脂颗粒介导SREBP-1c信号转导途径改善肝细胞脂质积聚研究

课题组在凝练脾胃病学家黄文东先生学术思想的基础上，结合临床流行学证据提出"痰湿困脾"为NAFLD的核心病机，临床及实验研究均已证实降脂颗粒具有较好的改善脂肪肝效果。前期完成的国家自然科学基金课题研究发现：降脂颗粒通过改善NAFLD大鼠瘦素抵抗、胰岛素抵抗发挥对脂肪肝的防治作用，这种作用可能和SREBP-1c基因的表达有关。SREBP-1c是调节脂代谢的重要核转录因子，其转录表达异常直接导致肝细胞脂质积聚，形成NAFLD。本课题在前期研究工作的基础上，进一步以高脂脂肪肝大鼠模型，结合LXR激动剂肝细胞体外模型、RNAi肝细胞体外模型，应用病理学、生物化学、分子生物学和血清药理学等实验技术，从基因、蛋白水平观察降脂颗粒对LXRα→SREBP-1c→FAS信号通路作用靶点及强度，以期阐明祛湿化痰健脾治法介导SREBP-1c信号通路治疗NAFLD的机理，提升中医药防治脂肪肝的研究水平。

青年科学基金项目研究证实，应用高脂饲料饮食诱导大鼠脂肪肝模型后，HFD组大鼠显著增加了血清TC、TG、ALT、AST水平，降脂颗粒可以显著改善这一增高，表明降脂颗粒能够改善血脂及HFD诱导的肝脏损伤。HE病理图像证实，HFD显著增加肝脏脂肪变，肝脏脂肪TG含量测定显示HFD组升高5.5倍，应用降脂颗粒后改善了肝脏病理脂肪变及肝脏甘油三酯含量。降脂颗粒改善了HFD诱导的大鼠肝脏中LXRα， pSREBP-1c，mSREBP-1c和 FAS的mRNA及蛋白的表达。为了进一步明确降脂颗粒药物作用效果，我们应用FFA诱导的脂肪变HepG2肝细胞模型，验证降脂颗粒对SREBP-1c信号通路的作用靶点。进一步体外研究显示：应用棕榈酸诱导HepG2制备肝细胞脂肪变性体外模型后，降脂颗粒含药血清可以降低FFA刺激的HepG2细胞脂质堆积；可以抑制LXRα激动剂（T090）和FFA刺激的LXRα及其下游SREBP-1c和FAS的表达，LXRα是降脂颗粒治疗NAFLD的一个作用靶点。对LXRα进行RNAi后，降脂颗粒对FFA刺激的HepG2细胞的pSREBP-1c表达几乎无影响，但显著降低了mSREBP-1c和FAS的表达。表明降脂颗粒也可以不依赖LXRα通路，直接抑制SREBP-1c的成熟形式，达到改善肝细胞内脂肪堆积的作用。本项研究证实，降脂颗粒改善了HFD诱导的大鼠肝脏中LXRα，pSREBP-1c，mSREBP-1c和 FAS的mRNA及蛋白的表达。进一步体外研究证实，降脂颗粒含药血清可以降低FFA刺激的HepG2细胞脂质堆积；可以抑制LXRα激动剂（T090）和FFA刺激的LXRα及其下游SREBP-1c和FAS的表达，LXRα是降脂颗粒治疗NAFLD的一个作用靶点。对LXRα进行RNAi后，降脂颗粒对FFA刺激的HepG2细胞的pSREBP-1c表达几乎无影响，但显著降低了mSREBP-1c和FAS的表达。表明降脂颗粒也可以不依赖LXRα通路，直接抑制SREBP-1c的成熟形式，达到改善肝细胞内脂肪堆积的作用。课题组的研究证实，降脂颗粒应用祛湿化痰、健脾活血法治疗NAFLD，是通过调控SREBP-1c信号通路改善肝细胞脂质代谢异常来实现的。