基于金属蛋白组学技术研究金属与金属酶在高脂血症进程中的作用机理

Metal elements have important biological functions and they make up a variety of enzymes. They must be controlled at strict homeostasis in organisms, and can affect the metabolism and stability of bodies when they have change. This study focuses on hyperlipidemia patients as research object, and illustrates the mechanism of metal and metal enzyme in the metabolism of organism and its mechanism in the occurrence of hyperlipidemia through metal proteomics method. Main content includes: (1) ICP-MS analysis of total elements in serum to find relevant elements markers; (2) HPLC-ICP-MS analysis of biomarkers for speciation of above elements, getting the states of elements exist; (3) Using the modified two-dimensional electrophoresis combined with laser ablation with ICP-MS to find relevant metal enzyme markers, and do quantitative analysis of elements and determined the structure of metal enzyme, so as to clarify the occurrence of hyperlipidemia in the aspects of metal and metal enzyme. The implementation of this project will be conducive to analytical chemistry, biochemistry, molecular biology and other related disciplines of cohesion and integration. This study can obtain microcosmic point of view about the cell metabolism and comprehensive understanding of disease, and has significance in promoting the research of metal omics and lays the foundation for the therapy of hyperlipidemia.

金属元素具有重要的生物学功能，参与构成体内多种酶，在生物体内必须处于严格的内稳态控制，一旦变化，会影响代谢功能和稳定性。本研究以高脂血症患者为研究对象，通过金属蛋白组学技术，全面阐述金属与金属酶在生物体内的代谢机制及在高脂血症进程中的作用机理。研究包括（1）通过电感耦合等离子体质谱法对患者血清中元素总量进行分析，找到相关靶标元素；（2）通过高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法对上述靶标元素进行形态分析，获取元素存在状态；（3）通过非变性二维电泳结合激光剥蚀-电感耦合等离子体质谱联用法找到相关靶标金属酶，对其中元素进行定量，并确定金属酶结构，从而阐明金属与金属酶在高脂血症进程中的本质关系。本项目的实施，将有利于分析化学、生物化学、分子生物学等相关学科的衔接与交叉集成，可从微观角度上获取关于细胞代谢、疾病发生等过程的整体认识，对推动金属组学的研究具有积极意义，为高血脂症有效治疗奠定基础。

微量元素参与人体生长发育等一系列的生命活动，与人体的健康有着密切的关系。高脂血症患者体内微量元素的异常变化，很可能是该疾病发生的诱因及疾病发展的结果。本项目主要研究如下（1）通过电感耦合等离子体质谱法对患者血清中元素总量进行分析，对人血浆中Co、Ni、Mo、Hg、Cu、As、Se、Cd、Zn、Mn、Cr、Fe、Pb、Li和V共15种元素进行了检测，结果发现有五种金属元素(Se、Cr、Zn、Fe、Cu)在高脂血症对照组与正常对照组含量比较中有明显差异(P < 0.05)。（2）通过高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法对高脂血症与健康人血浆中不同形态硒的含量差异进行分析。采用两种血浆前处理方法检测血浆中五种硒代谢物进行准确定量。结果发现与正常对照组相比，高脂血症组Se(IV)、SeMet与SeCys均有明显降低(P < 0.05)，而这三种代谢物在体内硒代谢中有着重要的作用，所以对于预防高脂血症，可以将这三种硒代谢物作为重要的指标化合物。（3）通过二维电泳结合电感耦合等离子体质谱并联合MALDI-TOF-MS的方法，找到相关靶标金属酶。检测出两种因患高脂血症而带有金属铬的蛋白质GPx-3和ApoaI。完成了ELISA法对血浆中锌元素相关基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9对高脂血症患者的影响。为进一步阐明血脂的代谢机制和高脂血症的治疗提供基础和新思路。