LncRNA-znf518A竞争性结合miR-101-3P调控AR-V7在去势抵抗型前列腺癌中的作用与机制研究

The high expression of AR-V7 is one of the most important mechanisms for the development of castration-resistant prostate cancer (CRPC). The regulating mechanism of AR-V7 is still not clear. It is reported that long non-coding RNA (lncRNA) could affect the formation and development of tumor. We used lncRNA expression profile and CRPC cell lines to select the lncRNA-znf518A. We further found that lncRNA-znf518A can bind miR-101-3P. Luciferase reporter assay confirmed that miR-101-3P can also bind 3'-UTR of AR-V7. Therefore, we hypothesized that lncRNA-znf518A could change AR-V7 expression by regulating miR-101-3P, thus affecting the formation of CRPC. The project will examine the consequences of up- or down-regulation of lncRNA-znf518A in prostate cancer cells in terms of miR-101-3P and AR-V7 expression and interaction as well as sensitivity to enzalutamide and cell invasion. We will also explore the mechanistic relationship among the lncRNA-znf518A, miR-101-3P and AR-V7 in clinical samples and nude mouse orthotopic tumor model. Success of this project will provide a scientific basis for searching novel molecular diagnostic markers for and potential therapeutic approaches for CRPC.

AR-V7高表达是去势抵抗型前列腺癌(CRPC)形成的重要原因，其调节机制尚不明确。研究显示长链非编码RNA（lncRNA）可参与肿瘤的发生发展。我们前期通过lncRNA表达谱及前列腺癌细胞株筛选出lncRNA-znf518A,且该lncRNA有miR-101-3P的结合位点;而miR-101-3P可与AR-V7结合, 并经荧光素酶报告基因验证。故我们推测：lncRNA-znf518A靶向结合miR-101-3P调控AR-V7的表达促进CRPC的发生发展。本项目拟通过沉默或过表达前列腺癌细胞株中lncRNA-znf518A后检测miR-101-3P、AR-V7的表达、相互关系、肿瘤耐药和侵袭性，并结合裸鼠原位成瘤及临床病理标本，探讨lncRNA-znf518A和AR-V7在CRPC发生发展中的作用。本研究的完成可为寻找CRPC新的论断瘤标和治疗靶标提供依据。

1. 背景：新应用的抗雄激素恩杂鲁胺 (Enz)和雄激素剥夺疗法(ADT)可以延长去雄抵抗性前列腺癌(CRPC)患者的生存时间4.8个月。随着Enz耐药性的增加，大量患者无法达到治疗效果。对其机制的研究对于Enz耐药前列腺癌的治疗具有重要意义。尽管雄激素受体(AR)剪接变体ARv7表达在Enz耐药进展中的关键作用已被强调，但其潜在机制，特别是与lncRNA相关的机制尚不清楚。我们在对人类临床样本的调查中发现lncRNA znf518A在具有更高Gleason评分的PCa中表达更高，我们还在体外细胞系研究中发现，CRPC C4-2 Enz耐药(EnzR-C4-2)细胞的lncRNA znf518A表达高于其亲本Enz敏感(Enzs-C4-2)细胞。2. 研究方法及结果：抑制lncRNA znf518A在EnzS-C4-2细胞中的表达可降低ARv7的表达，从而降低Enz耐药性和细胞的侵袭能力。机制研究表明Enz在转录水平上抑制lncRNA znf518A的表达，lncRNA znf518A通过影响miR-101-3p，调控ARv7 3 ' UTR和miR-101-3p的结合。在临床前研究中，EnzR-CWR22Rv1细胞被用作移植细胞，并在体内小鼠模型中进行移植。结果显示，敲除lncRNA znf518A可以抑制EnzR-CWR22Rv1细胞的生长。3.综上所述，这些临床前研究结果提示lncRNA znf518A可能作为一种致癌物质，通过改变miR-101-3p/ARv7信号转导通路，改变Enz敏感性和CRPC细胞的侵袭能力，这一新发现的信号转导途径可能有助于开发更好的治疗方法，进一步抑制EnzR细胞的生长。