LncRNA CYTOR 特异性调节AR-V7的剪接在去势抵抗性前列腺癌形成中的作用

The continuous activation of AR signaling pathway is the key driving factor for the development of CRPC. Although well mixed amine and two kinds of abiraterone AR signaling pathways antagonist drugs can bring survival benefit for patients with CRPC, but AR - V7 produce drug AR signaling pathway is the main cause of treatment failure. Therefore, it is the key to explore the molecular mechanism of regulating AR-V7 specific splicing to solve the development of drug resistance and CRPC of anti-ar signaling pathway. The LncRNA CYTOR and the splicing factor SRSF4 and SRSF7 were closely related to the splicing of ar-v7 by transcriptional sequencing and bioinformatics analysis. On this basis, the research group demonstrated that CYTOR and splicing factor formed a splicing complex through cell experiments, and then combined with ar-v7 pre-mrna to participate in the variable splicing molecular mechanism of AR-V7. Then, in view of the specific binding site design load antisense oligonucleotide nanoparticles, verify that the in vivo and in vitro nanoparticles targeting specific splice site of AR-V7 and recovery sensitivity of anti-AR drug and the effectiveness of blocking CRPC formation , provide a new direction for CRPC forming mechanism and accurate treatment.

AR信号通路的持续活化是CRPC发生发展的关键推动因素。虽然恩杂鲁胺和阿比特龙两种AR信号通路的拮抗药物能为CRPC患者带来生存获益，但是AR-V7的产生是导致抗AR信号通路药物治疗失败的主要原因。因此，探索调控AR-V7特异性剪接的分子机制是解决抗AR信号通路药物耐药及CRPC发生发展的关键。课题组前期通过转录本测序及生物信息学分析筛选出LncRNA CYTOR以及剪接因子SRSF4和SRSF7与AR-V7的剪接密切相关。在此基础上，课题组通过细胞实验证实CYTOR与剪接因子形成剪接复合体，继而与AR-V7 pre-mRNA相结合，参与AR-V7的可变剪接分子机制。随后，针对特异性结合位点设计负载反义寡核苷酸的纳米颗粒，体内外验证该纳米颗粒靶向AR-V7的特异性剪接位点对恢复抗AR信号通路药物的敏感性及阻断CRPC发生的有效性，为CRPC形成机制和精准治疗提供新的方向。

AR信号通路的持续活化是CRPC发生发展的关键推动因素。虽然恩杂鲁胺和阿比特龙两种AR信号通路的拮抗药物能为CRPC患者带来生存获益，但是AR-V7的产生是导致抗AR信号通路药物治疗失败的主要原因。因此，探索调控AR-V7特异性剪接的分子机制是解决抗AR信号通路药物耐药及CRPC发生发展的关键。在去势抵抗性前列腺癌细胞系LNCaP-AI和雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP的RNA芯片结果中，通过qRT-PCR和western blot实验，结合生物信息学分析方法，发现敲低剪切因子SRSF4和SRSF7的表达水平能够降低AR-V7的表达水平，通过RIP和REMSA实验发现剪切因子SRSF4和SRSF7能够结合到AR-V7 pre-mRNA的隐藏外显子3内的剪切增强元件上，促进AR-V7 mRNA的可变剪切。结合SRSF4和SRSF7共表达网络分析等生物信息学方法，筛选出多个长链非编码RNA可能参与AR-V7的表达，通过小干扰RNA及慢病毒转染等实验改变长链非编码RNA CYTOR的表达水平，发现敲低CYTOR能够降低AR-V7的表达，通过RIP及Co-IP实验发现剪切因子SRSF4和SRSF7存在间接相互作用且能够与CYTOR、AR-V7 pre-mRNA结合。设计封闭CYTOR识别AR-V7 pre-mRNA剪切信号序列（包括AR-V7 pre-mRNA内和CYTOR内的信号序列）的ASO能够有效降低AR-V7 mRNA的水平。在患者石蜡包埋组织样本的检测中，发现CYTOR与AR-V7在CRPC中表达水平高于良性前列腺组织和雄激素依赖性前列腺癌组织，且在新鲜CRPC组织和石蜡包埋CRPC组织中两者的表达存在正相关。体外细胞功能实验及体内动物移植瘤实验均证明，敲低CYTOR的表达水平能够使得雄激素受体拮抗剂恩杂鲁胺更有效的抑制CRPC细胞系LNCaP-AI、22Rv1及裸鼠移植瘤的生长。因此，靶向CYTOR诱导的AR-V7可变剪切过程能够有效抑制CRPC的进展，增强癌细胞对雄激素受体拮抗剂恩杂鲁胺的药物敏感性，缓解前列腺癌的进展，一定程度上解决恩杂鲁胺耐药的难题。