Rgs5调控PDGF-β/PDGFR-β信号通路募集肿瘤周细胞逆转血管异质性的机制研究

肿瘤新生血管构筑表型和功能异质性，是抗血管生成治疗效果不佳的主要原因。目前对肿瘤血管异质性的研究主要在内皮细胞和内皮祖细胞,对周细胞的研究很少，而周细胞在肿瘤血管的发展、稳定、成熟及重塑过程中发挥着关键作用。研究表明在肿瘤组织内，G蛋白信号调节蛋白5（ Regulator of G Protein Signaling 5，Rgs5）的表达缺失可促进周细胞成熟、逆转肿瘤血管异质性，但其机制还有待进一步阐明。基于新近研究我们提出Rgs5通过抑制PDGF激活的ERK-2磷酸化信号传导途径，调节周细胞的募集和分化，逆转卵巢癌血管异质性的设想。拟通过免疫共沉淀技术检测Rgs5和PDGFR-β及EDG-1的结合情况，体内通过三维成像技术，观察干扰和上调Rgs5后对PDGFR-β募集周细胞的影响，以及血管形成的变化，探索Rgs5是否通过抑制PDGFR-β信号通路来调控周细胞的募集，逆转卵巢癌血管异质性。

肿瘤新生微血管的构筑和表型与正常新生血管存在差异,是抗血管生成药物疗效不佳的原因。基于Rgs5与PDGFR-β共同高表达于肿瘤血管的时效性，我们提出Rgs5与PDGF/ERK-2通路促进细胞募集，参与血管的生成、发展及成熟的调控相关。本项目采用免疫组化、激光共聚焦、原代细胞培养、分子生物学、病毒克隆和SiRNA干扰等手段发现：（1） Rgs5在卵巢癌血管和癌细胞均有表达，在癌细胞的表达与PDGFR-β以及CD34标记的MVD呈负相关，其表达的高低与卵巢癌患者腹膜转移和预后显著相关；（2）Rgs5在卵巢癌微血管内皮细胞ODMECs中的表达与新生血管的标记物Endoglin重叠， Endoglin在卵巢癌体外血管生成模型中调控内皮细胞的出芽，促进血管腔样结构的生成；（3）Rgs5的表达在ODMECs体外管腔样结构形成时降低，并且随细胞培养时间的延长递减，在主动脉平滑肌细胞HASMC中亦未见有明显的高表达，促血管生成因子VEGF与PDGF-BB对其表达均无明显的刺激作用；（4）缺氧可诱导Rgs5在ODMECs的表达，并且在缺氧条件下Rgs5可抑制ODMECs细胞增殖，使细胞周期不能从G1期进入S期；（5）Rgs5可抑制分裂周期蛋白CDC25A以及与细胞周期密切相关的CDK2蛋白和细胞周期蛋白CyclinE的表达；（6）下调 RGS5蛋白表达后MAPK通路中ERK磷酸化水平降低，ERK1/2抑制剂PD98059亦可使CDC25A、CDK2及CyclinE蛋白的表达下降，其作用与RGS5有协同效应，二者可明显降低细胞的增殖率。上述结果表明Rgs5表达的高低与腹膜转移和患者预后相关，并通过抑制MAPK/ERK 介导的CDC25A生成，参与卵巢癌血管内皮细胞周期和增殖的调控。