FHL2在硼替佐米诱导多发性骨髓瘤患者间充质干细胞成骨分化中的作用

超过85%的多发性骨髓瘤（MM）病人存在溶骨性骨病，大大降低了病人的生活质量。目前对MM骨病的标准治疗仅限于二膦酸盐，但骨病仍常常进展。硼替佐米（Bzb）除了有抗肿瘤活性，还可促进成骨，其作用靶标是间充质干细胞（ MSCs）。FHL2作为一种共调节因子能与调节骨重塑信号系统中的多种蛋白相互作用，促进成骨，抑制破骨。在地塞米松诱导MSCs的成骨分化过程中，FHL2作为内源性激活子并激活Wnt/β-catenin信号依赖的Runx2表达，从而促进MSCs向成骨细胞（OBL）分化。但在Bzb对MM骨病的治疗过程中，FHL2是否具有类似的作用及其机制目前尚无报道。我们前期研究确证Bzb能在体外诱导MM-MSCs向OBL分化，在此过程有FHL2蛋白的表达增加，且Bzb对FHL2的表达增加呈剂量依赖性。因此，我们设计了本课题，探讨FHL2在Bzb诱导MM-MSCs向OBL分化过程中的作用及其可能机制。

我们以FHL2为切入点探讨硼替佐米诱导骨髓瘤患者间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的作用机制，从而探讨Bzb对骨重塑平衡的修复作用及其机制，为患者骨病的治疗提供实验和理论依据。结果如下：.(1) 成功获得MM-MSCs。使用13q14(RB-1), 14q32(IGHC/IGHV), 1q21(CKS1B), 和 17 p13(TP53)探针检测6例患者浆细胞（plasma cells, PCs）和对应的MSCs的遗传学异常，发现MM-MSCs不具有相应浆细胞的遗传学异常。.(2) Bzb能诱导MM-MSCs成骨分化；FHL2蛋白表达水平在Bzb处理后上调。Western Blot 分析显示FHL2蛋白水平在Bzb处理24小时后升高，10nM以下具有剂量依赖。实时定量RT-PCR显示7天的Bzb处理在诱导FHL2表达的同时，促进了成骨标志基因Runx2, ALP 和 Col1A1的表达。.(3) FHL2基因沉默削弱Bzb诱导的MM-MSCs成骨分化。Western Blot和 实时定量RT-RCR结果证明成功获得稳定敲除表达FHL2的MM-MSCs (sh-FHL2)。与对照sh-SCR相比，sh-FHL2 削弱了Bzb诱导的成骨标志基因Runx2, ALP 和 Col1A1 mRNA水平的表达，同时茜素红染色证明了sh-FHL2能削弱Bzb诱导的矿化形成。.(4) sh-FHL2 削弱了Bzb诱导成骨分化过程中的β-catenin入核。免疫荧光检查结果显示，sh-FHL2 削弱了Bzb诱导成骨分化过程中的β-catenin入核，同时β-catenin在Bzb处理后被限制在了核附近。.结论：FHL2在Bzb诱导的MM-MSCs成骨分化过程中起重要作用，能够促进成骨形成。蛋白酶体抑制剂治疗和靶向FHL2的策略为治疗骨髓瘤骨病提供很好的实验和理论依据。..【关键词】骨髓瘤骨病 硼替佐米 FHL2 间充质干细胞