经PGC-1α与RGS5 信号通路联合调控血管内皮细胞和周细胞阻抑视网膜新生血管形成的实验研究

视网膜新生血管性疾病常因其引发的出血、渗出及增生等病理改变将严重损害视功能。目前以血管内皮细胞(EC)为焦点的治疗方案难以解决新生血管再通、复发和退化的难题。周细胞(PC)不仅是EC 形态上紧密相连的支托细胞，更是EC 生存的保护细胞，两者共同影响着病理性血管新生和退化进程。联合调控EC 和PC 的治疗策略将是阻抑视网膜新生血管形成的新突破口。本项目以过氧化物酶增殖激活受体-γ共激活子-1α（PGC-1α）和 RGS5 作为新的干预靶点，利用两者能联合调控 EC 和 PC 参与血管新生不同环节进而影响血管新生和退化进程的优势，从分子、细胞水平观察PGC-1α 与 RGS5 信号通路的干预对视网膜血管EC 和PC 形态及功能的影响。力图阐明 PGC-1α 与 RGS5 信号通路联合调控 EC 和 PC 参与视网膜新生血管形成和退化的机制，为视网膜新生血管相关性疾病找到新的基因治疗方法。

视网膜新生血管性疾病常因其引发的出血、渗出及增生等病理改变，导致眼部结构和功能的破坏，严重损害视功能。目前以血管内皮细胞(EC)为焦点的治疗方案难以解决新生血管再通、复发和退化的难题。周细胞(PC)不仅是 EC 形态上紧密相连的支托细胞，更是 EC 生存的保护细胞，两者共同影响着病理性血管新生和退化进程。联合调控 EC 和 PC 的治疗策略将是阻抑视网膜新生血管形成的新突破口。本项目以过氧化物酶增殖激活受体-γ共激活子-1α（PGC-1α）和 RGS5 作为新的干预靶点，利用两者能联合调控 EC 和 PC 参与血管新生不同环节进而影响血管新生和退化进程的优势，从分子、细胞水平观察 PGC-1α 与 RGS5 信号通路的干预对视网膜血管 EC 和 PC 形态及功能的影响。力图阐明 PGC-1α 与 RGS5 信号通路联合调控 EC 和 PC 参与视网膜新生血管形成和退化的机制，为视网膜新生血管相关性疾病找到新的基因治疗方法。通过本实验：1、建立视网膜新生血管（ROP）动物模型。2、检测 RNV 形成过程中不同时间段的 PGC-1α 和 RGS5 信号通路相关调控蛋白的表达。在成功建立了动物模型后我们运用免疫组织化学及Western blot 等方法检测PGC-1α 信号通路和下游效应轴相关基因的mRNA 表达水平，包括 PGC-1α、VEGF及RGS5 相关调控基因的 mRNA 表达水平包括 RGS5、EDG、PDGFR-β、PDGF-β等。3、构建 PGC-1α 基因和 RGS5 基因 的 siRNA 干扰重组载体，完成体外干扰实验；建立 EC-PC 共培养体系。通过流式细胞术、分子生物学和免疫组化等方法，从细胞水平观察到 PGC-1α 与 RGS5 信号通路的激活和阻断干预对调控视网膜微血管 EC 和 PC 形态、功能和分化方面的体外影响。实验证实PGC-1α 与 RGS5信号通路联合干扰可有效控制视网膜新生血管的发生。