CD24-Siglec 10信号通路防治急性肝功能衰竭的作用及机制

HMGB1 is confirmed as an important factor in acute hepatic failure，which is the terminal phase of a variety of liver diseases. Applicants found the recombinant HMGB1 protein could increase the expression of HMGB1 and inflammatory cytokines, as well as the recombinant HMGB1-Abox protein could have the opposite effect. And we comfirmed that reducing HMGB1 secretion could reverse acute liver damage. Recent studies have shown that the increasing of CD24-Siglec 10 could inhibit HMGB1 secretion strongly. But the effect and mechanism of CD24-Siglec 10 pathway in acute hepatic failure have not been previously reported. We will construct lentviral vector (Len-CD24-Siglec 10) to transfect on mononuclear-macrophages, liver sinusoidal endothelial cell and the mice with acute hepatic failure. Using these methods, we will study the effect of CD24-Siglec 10 pathway on secretions of HMGB1，inflammatory cytokines and liver function of mice with acute liver failure.Then，we will research the mechanism of inhibitory effect of CD24-Siglec 10 on the HMGB1-mediated immune response and damage of endothelial cells.Ultimately,we will clarify the role and molecular mechanism of CD24-Siglec 10 in acute liver failure,which will provide a new theoretical foundation and approach for the prevention and treatment of acute liver failure.

急性肝衰竭是肝病快速进展的终末阶段，HMGB1被证实在其中起重要作用。申请者发现重组HMGB1蛋白可刺激组织细胞高表达HMGB1及相关炎症因子，而重组HMGB1-Abox蛋白起明显抑制作用；并证实阻断HMGB1分泌能减轻急性肝损伤。新近研究显示上调CD24-Siglec 10通路能抑制HMGB1分泌，但CD24-Siglec 10通路对急性肝衰竭的作用及其机制尚无报道。我们拟构建慢病毒载体Len-CD24-Siglec 10，并转染单核巨噬细胞、肝窦内皮细胞及急性肝衰竭小鼠，观察该载体对细胞、机体分泌HMGB1及其相关炎症因子和肝衰竭小鼠肝功能的影响，研究CD24-Siglec 10通路抑制HMGB1介导的免疫反应及内皮细胞损伤的机制，最终阐明CD24-Siglec 10在急性肝衰竭中的作用及其分子机制，为急性肝衰竭的防治提供新的理论基础和治疗手段。

急性肝衰竭是肝病快速进展的终末阶段，HMGB1被证实在其中起重要作用。申请者发现重组HMGB1蛋白可刺激组织细胞高表达HMGB1及相关炎症因子，并证实阻断HMGB1分泌能减轻急性肝损伤。研究显示抑制CD24-Siglec 10通路能增加HMGB1分泌，但CD24-Siglec 10通路对急性肝衰竭的作用及其机制尚无报道。我们通过构建腺病毒载体Ads-CD24及Ads-Siglec G，转染单核巨噬细胞、肝窦内皮细胞及急性肝衰竭小鼠，观察该病毒对细胞、机体分泌HMGB1及其相关炎症因子和肝衰竭小鼠肝功能的影响。结果证实：转染Ads-CD24、Ads-CD24/Siglec G后，在急性肝衰竭小鼠血清、LPS、APP的刺激下，单核巨噬细胞及肝窦内皮细胞表达炎性因子（TNF-α、 IL-1β、 IL-2 、 INF-γ）和血管活性因子（TF、TM） mRNA水平及细胞上清炎性因子含量均明显低于空白组和对照组；其中共转染Ads-CD24/Siglec G的细胞组，在三种模拟状态下所释放的炎性因子水平最低；与之相对应的是细胞内及细胞核内HMGB1的表达呈现出总量相当但核内增加明显的趋势，说明CD24-Siglec G的增加促进HMGB1由胞内向核内转移。而在体内试验中，感染Ads-CD24、Ads-CD24/Siglec G的小鼠在急性肝衰竭造模后，血清中细胞因子IL-1β的含量较普通肝衰竭小鼠明显下降， IL-2 、 INF-γ的表达在试验中段（8小时）出现下调，且峰值出现时间延长，而TNF-α峰值表达同样也降低明显；而感染病毒后的小鼠其HMGB1在肝组织内和血清中的表达均明显少于普通肝衰竭小鼠。由此可见：不论在体外实验还是体内实验，实验数据均表明CD24-Siglec G通路可以减少HMGB1自核内向胞内转移，从而减少炎症发生发展时HMGB1的主动释放，阻断了HMBG1对炎症的级联放大效应，减少炎症因子及血管活性因子的释放及趋化、改善肝脏微循环障碍，最终得以减轻肝脏组织损伤，提高生存率，起到对肝脏的保护作用。这一发现也为其他免疫过激引起的疾病如发热伴血小板减少综合征的研究提供了新的研究方向，也为进一步研究重症肝炎治疗手段提供了新的思路。