PGC-1α调控视网膜新生血管形成的研究

视网膜新生血管可导致严重的致盲性眼病，一直是眼科界的研究重点。最新研究发现过氧化物酶增殖激活受体-γ共激活子-1α（PGC-1α）能上调包括VEGF在内的血管生成因子的表达，促进新生血管形成，而且PGC-1α对VEGF的调控作用要强于HIF-1α。我们前期研究证实PGC-1α在视网膜有表达，并且受缺氧的正调控。在此基础上，本项目将首先在HUVEC中检测PGC-1α的表达变化；转染重组PGC-1α和PGC-1α siRNA证实PGC-1α对VEGF的调控作用，并观察其对HUVEC体外管腔形成的影响。然后建立氧诱导的视网膜新生血管小鼠模型，检测PGC-1α在视网膜中的表达定位；玻璃体腔注射重组PGC-1α和PGC-1α siRNA，检测其对视网膜VEGF及视网膜新生血管形成的调控作用。本项目将阐明PGC-1α调控视网膜新生血管形成的分子机制，有望找到新的基因治疗靶点及更有效的基因治疗方法。

视网膜新生血管可导致严重的致盲性眼病，一直是眼科界的研究重点。本项目为了探讨PGC-1α对视网膜新生血管形成的调控作用，从体外和体内实验两方面展开了研究。.体外实验中，我们将人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）分成常氧（20%）组和低氧（1%）组。细胞低氧培养3h，再恢复常氧培养3h、6h、24h。PGC-1α mRNA和蛋白的表达在低氧3h后明显上调，恢复常氧培养3h、6h、24h后，表达逐渐下调。HUVEC转染重组PGC-1α蛋白24h后，VEGF mRNA和蛋白的表达较对照组均上调。HUVEC转染PGC-1α siRNA 24h后，再继续于常氧和低氧环境下培养16h，PGC-1α、VEGF mRNA和蛋白的表达均被明显抑制。HUVEC转染重组PGC-1α蛋白48h后，将细胞转移至Matrigel基底膜包被的培养板，继续于常氧和低氧环境下培养48h，细胞管腔形成增多，而转染PGC-1α siRNA后，细胞管腔形成减少。.体内实验中，C57BL/ 6J小鼠在出舱后6小时（P12 6h），PGC-1α mRNA和蛋白表达开始上调，到P17达到高峰。玻璃体腔注射Cy3标记的PGC-1α siRNA后24小时检测其在视网膜有表达。正常鼠和模型鼠在玻璃体腔注射重组PGC-1α后，血管生成均增加，VEGF的表达均增加，模型鼠更明显。玻璃体腔注射PGC-1α siRNA， PGC-1α siRNA组较模型组和模型对照组新生血管丛明显减少，荧光渗漏明显 减轻；PGC-1α siRNA组较模型组和模型对照组突破视网膜内界膜的细胞核数量减少，差异均有统计学意义（P<0.01）。视网膜PGC-1α mRNA及蛋白表达水平：模型组和模型对照组较正常组上调，而PGC-1α siRNA组较模型组下调，抑制效率分别为54%和53%，差异有统计学意义（P<0.01）。VEGF mRNA及蛋白表达水平：模型组和模型对照组较正常组明显上调，而PGC-1α siRNA组较模型组明显下调，差异均有统计学意义（P<0.01），抑制效率分别为48%和40%。PGC-1α和VEGF阳性表达主要位于视网膜神经节细胞层和内核层。模型对照组和模型组均为强阳性表达，而PGC-1α siRNA组的表达较模型组减弱。.本项目初步阐明了PGC-1α调控视网膜新生血管形成的分子机制，有望找到新的基因治疗靶点。