基于保护脑血管内皮细胞紧密连接研究芎芪有效成分配伍对急性脑梗死大鼠溶栓后出血转化的预防作用

溶栓是急性脑梗死目前最有效，也是唯一有循证医学证据的治疗措施，但可引起出血转化等严重并发症。我们认为出血转化的主要病理机制是梗死区血管内皮细胞紧密连接完整性破坏，属于破血逐瘀导致的血脉病变，病机为破血耗气，脉道不固，血不循经。通过益气活血化瘀治疗可有效防止溶栓后的出血转化。本课题在既往研究的基础上，通过在体和离体研究，分时点观察芎芪合剂及其有效成分配伍对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后血管内皮细胞紧密连接蛋白及血管基底膜的影响，抑制基质金属蛋白酶活性，调节跨膜蛋白Claudin、Occludin、ZO-1和连接粘附分子JAM水平，阻止紧密连接复合体Occludin-ZO1-actin、Claudins-ZO1-actin连接的断裂，保护溶栓后血管内皮细胞紧密连接的完整性，阐明芎芪合剂及其有效成分配伍防止溶栓后出血转化的作用机制，探索中西医结合新的切入点，开拓中医药治疗急性脑血管病的新思路。

溶栓是急性脑梗死目前最有效也是唯一有循证医学证据的治疗措施，但是会引起出血转化等严重并发症，我们认为出血转化的主要病理机制是梗死区血管内皮细胞紧密连接完整性的破坏，属于破血逐瘀导致的血脉病变，病机为破血耗气，脉道不固，血不循经，因此通过益气活血化瘀治疗可以有效防止溶栓后的出血转化，本项目在前期既往研究的基础上，通过在体动物模型的研究，分时点观察了芎芪合剂及其有效成分配伍对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后血管内皮细胞紧密连接蛋白及血管基底膜的影响，对机制金属蛋白酶活性及跨膜蛋白Claudin、Occludin、Zo-1和连接粘附分子JAM水平的影响来探讨芎芪合剂及其有效成分配伍干预溶栓后出血转化的作用机制，研究结果显示：对急性缺血性卒中大鼠进行rt-PA溶栓治疗，随时间延长，血脑屏障通透性会显著增加。黄芪及川芎注射液配伍应用可以显著降低血脑屏障通透性，降低溶栓对紧密连接相关蛋白Claudin-1、Claudin-5的破坏作用，这可能是对溶栓后大鼠血脑屏障结构与功能保护作用的机制之一。同时各研究结果均发现川芎嗪注射液与黄芪注射液配伍应用，对保护血脑屏障和TJ结构的作用效果较单用一种更显著，也更持久。rt-PA溶栓治疗可增加了HT的风险，并随时间延长而有所加重，川芎嗪及黄芪注射液可不同程度地减轻溶栓后出血量，且二者联合使用(芎芪有效成分)对减轻溶栓后出血量效果更好。且芎芪有效成分有利于溶栓后大鼠整体状况及神经功能恢复。其芎芪有效成分预防急性脑梗死溶栓后出血转化的机制可能在于芎芪有效成分能阻断纤溶酶对基质金属蛋白酶系统的激活作用，减少MMP-2、MMP-9的活性与表达，提高TIMP-1的表达，调控MMPs、TIMPs系统平衡，保护血管屏障的通透性及完整性，从而预防溶栓后出血转化。川芎及黄芪的中药针剂川芎嗪注射液和黄芪注射液配伍应用，不但可以显著降低溶栓后血脑屏障的通透性，而且很好地保护了紧密连接相关蛋白ZO -1和Occludin.芎芪有效成分对PKC信号途径的抑制作用可能是其对血脑屏障保护作用的主要环节。我们的研究结果为开拓中西医治疗急性脑血管病开拓了新的思路。