HMGB1在原发性肝癌侵袭转移中的作用及其机制研究

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种能调节基因转录、DNA修复的非组蛋白核蛋白，在胞外具有两大功能：（1）作为晚期炎症介质参与炎症反应，（2）参与肿瘤细胞的增殖分化，与肿瘤的浸润和转移密切相关。目前尚无HMGB1与肝癌侵袭转移的研究。我们前期的研究发现，肝癌组织高表达HMGB1 ，重组HMGB1 促进人肝细胞HepG2 增殖，其上调PCNA、cyclinD1 蛋白的作用能被HMGB1 抗体所抑制。 本研究拟通过质粒转染和siRNA干扰等技术建立HMGB1高表达和HMGB1基因沉默的肝癌细胞株，研究HMGB1对肝癌细胞增殖、黏附、侵袭和迁移功能的影响及其相关机制，并通过裸鼠移植瘤模型观察HMGB1对HepG2成瘤的影响。本研究将进一步揭示HMGB1在肝癌侵袭转移中的作用，为将来以HMGB1 为靶点治疗肝癌、预防复发转移提供理论依据。

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种能调节基因转录、DNA 修复的非组蛋白核蛋白，在胞外具有两大功能：（1）作为晚期炎症介质参与炎症反应，（2）参与肿瘤细胞的增殖分化，与某些肿瘤的浸润和转移密切相关，如结肠癌、乳腺癌等。我们的前期工作表明肝癌组织高表达HMGB1，但HMGB1能否促进肝癌的增殖、侵袭和转移并不清楚。. 本研究通过构建HMGB1过表达逆转录病毒质粒和HMGB1 shRNA逆转录病毒质粒，并将质粒转染至HepG2细胞，获得稳定过表达HMGB1的HepG2细胞株和HMGB1基因沉默的HepG细胞株。通过MTT、流式细胞术、电镜、Transwell、ELISA和western blot等方法，发现HMGB1能促进肝癌细胞的增殖，抑制细胞凋亡，促进细胞自噬以增强肿瘤细胞的生存能力。HMGB1促进肝癌细胞的迁移和侵袭能力，并通过上调MMP-2、MMP9和uPA的表达，下调TIMP1、TIMP2来完成。通过建立裸鼠皮下移植瘤模型发现，抑制HMGB1表达后，移植瘤的生长减慢，瘤体缩小，肿瘤组织的血管形成减少，自噬水平降低，WB检测肿瘤侵袭相关分子表达水平显示MMP2、MMP9、uPA、PAI1、VEGF和LC3Ⅱ的表达水平均下降，TIMP1、TIMP2的表达水平增高。体内外实验结果基本一致。本研究为将来以HMGB1为靶点治疗肝癌提供了理论依据。