IV、RSV感染TLRS信号通路有效识别与双表法作用机制研究

呼吸道病毒是小儿肺炎最常见的感染病原，小儿极易感受外邪而引发肺系病证，是由其肺常不足生理特点所决定的，因而进行呼吸道病毒肺炎与TLRS信号通路生物学功能相关研究，将为阐明肺常不足易感免疫机制提供新的思路。本研究通过两种病毒即流感病毒（IV）鼠肺适应株及合胞病毒（RSV）long株诱导不同鼠龄段肺炎的比较研究，计算感染率及成模率，探讨病毒基因载量与病毒肺炎模型鉴定之间关系，为肺常不足的实质研究提供实验依据；同时采用双表法即解表法与固表法对呼吸道病毒肺炎的防控进行析因设计研究，观察TLRS信号通路表达及病毒易感免疫因子群组含量动态变化，探讨基于TLRS信号通路寻找肺常不足幼鼠病毒易感免疫机制，为扶正祛邪双表法在小儿病毒性肺炎临床应用提供理论依据和实验数据支撑，对中医药的继承与发展也具有重要的理论价值。

常见呼吸道病毒（IV、RSV）感染所致的小儿肺炎有逐年增高趋势，临床实践证实中医药防治小儿肺系病证有一定优势。银翘散、玉屏风散是临床防治病毒感染的有效方剂，深入探讨其抗病毒的作用靶点及其防治机制对中药病毒研究具有重大而深远的意义。本研究采用正交设计筛选银翘散、玉屏风散及其配伍银屏散最佳提取工艺，并应用高效液相法进行有效成分含量测定。体外实验，分析抗病毒药效活性。进一步，通过小鼠一般状态观察、肺指数、肺组织病理、RT-PCR技术测定病毒载量测定等，完成了不同鼠龄段小鼠对IV、RSV诱导的病毒性肺炎模型的比较研究，为肺常不足的实质研究提供实验依据。应用免疫组化法、RT-PCR技术，检测病毒诱导后小鼠肺组织中TLR4、Myd88、NF-κB蛋白及基因表达情况，探讨TLRS信号通路与幼鼠病毒性肺炎的相关性；采用免疫组化法和ELISA法，检测肺炎小鼠肺组织中TNF-α和IFN-γ蛋白的表达以及肺炎小鼠血清中炎性因子的含量，检测双表法对IV、RSV免疫因子含量的动态影响。通过体内抗病毒的实验研究，确定双表法的时-效、量-效关系，确定最佳给药方案；采用免疫组化、westen-blot法、RT-PCR技术，检测TLR4、TLR-7、MyD88、TRAF-2、NF-κB P6蛋白和基因的含量及表达，探讨双表法代表方剂抗IV、RSV调控机制和作用靶点。本研究对探讨中药防治小儿病毒性肺炎提供理论依据和实验数据支撑，对中医药的继承与发展也具有重要的理论价值。